目录1、输血前检测实验程序２、改良低离子聚凝胺法实验操作规程３、ABO 血型鉴定4、Ｒｈ(D）血型鉴定５、抗体筛选与鉴定试验输血前检测实验程序1、实验要求血清与血浆都可以用于交叉实验与抗体检测，最好就是血清标本，标本使用限制在３天内,含有肝素等抗凝标本可以用凝血酶或硫酸鱼精蛋白处理使其凝集析出血清。
允许通过静脉输液口采集标本,但必须丢弃受残留静脉输液影响得 5ml 标本。
一般不允许使用溶血标本,对急性溶血性贫血与烧伤病人得溶血标本,在实验前后必须做溶血程度得比较。
标本与输血申请单上得所有资料必须填写清楚并完全符合,否则应重抽标本。
对所有用过得献血员与受血者标本必须在１-6℃冰箱至少保存 7 天,所有实验都必须保证观察与记录同时进行,且记录与资料都必须至少保存５年。
2、血型检测要求完成病人ABO 正反定型、Rh（Ｄ)。
３、交叉试验3、1 受血者交叉配血时所用得标本必须就是输血前 3 天之内得。
３、２配血时要逐项核对输血申请单、受血者与供血者血样,复查受血者与供血者ABO 血型(正、反定型),并常规检查患者 Rh(D)血型(急诊抢救患者紧急输血时Rh（D)检查除外）,正确无误时可进行交叉配血。
3、３凡就是输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩红细胞、手工分离浓缩血小板等患者,应该进行交叉配血试验。
机器单采浓缩血小板、冷沉淀、新鲜血浆应与 ABＯ血型同型输注。
3、4 按《全国临床检验操作规程》要求完成凝聚胺交叉试验与检测不完全抗体得交叉试验（聚凝胺法、抗人球蛋白法) 。
除紧急输血与自身输血外,所有输入红细胞得其她制品均要求做血交叉试验。
3、５另外必须开展得试验有抗人球蛋白试验，抗体筛选实验。
改良低离子聚凝胺法实验操作规程1、目得:减少交叉配血试验得假阳性。
2、适用范围:交叉配血、血型鉴定、抗体筛检血型血清学试验。
3、试剂来源:(台资）珠海贝索生物技术有限公司4、采集与处理:4、１静脉采血 3-4ｍl，并观察就是否溶血、乳糜血，如有此现象应再留标本并做记录。
4、2 检查留样试管、标签、标号、姓名、血型就是否齐全,如有遗漏应拒收。
4、3 将血标本试管放 37℃水浴中 10 分钟,离心。
5、标准操作：5、1 主(次)管加入受（供)血者血清２滴,加供(受)血者 4%红细胞盐水悬液 1 滴。
5、2 各管加 LＩＭ0、8mｌ,混匀,静置１分钟,各管加Ｐolｙbrene Reａgen ｔ 1 滴，混匀，３０00转/分离心 1５秒,倒出上清液(残留约０、1ml),轻摇,肉眼可见明显得凝集状(如无凝集须重做），加假凝集清除液１滴于管底,轻摇,凝集 1 分钟内消失呈均匀混悬液,为阴性，凝集 1 分钟内不能被消除,即为阳性。
5、结论:阳性表示受(供)血者血清中含供（受)者红细胞血型Ag 相应得 Aｂ(IgG、ＩgＭ),供受血者不相容,阴性表示供受血者相容。
6、注意事项：６、1 操作者须严格按照操作说明进行试验,红细胞浓度、血清滴量、反应时间、离心速度等均可影响试验结果。
6、２若为弱凝集结果，本试剂盒按下述试验操作方法,还可进一步提高试验灵敏度。
试验操作方法如下:６、2、1 检测管中加试验血清 2 滴,４%红细胞盐水悬液 1 滴。
6、２、2 加 LIM0、8ml,混匀,静置１分钟,各管加Ｐｏlｙbrene 2 滴混匀,300０转/分离心15 秒，倒出上清液(残留约 01mｌ) ,轻摇，肉眼可见明显得凝集状(如无凝集须重做） ,加假凝集清除液 1 滴于管底，轻摇,凝集 1 分钟内消失呈均匀混悬液,为阴性，凝集1分钟内不能被消除,即为阳性。
６、3 检测标本应为非抗凝血，如标本中含抗凝成分得含量过高明显干扰凝集反应,可适当调加 Promotｅｒ得滴量,以中与抗凝成分得干扰。
6、4 试验温度以20-30℃为宜,若为寒冷凝集,37℃水浴5分钟,在此温下观察,凝集消失,说明冷凝集素存在。
６、５肉眼直观判断得结果应确保与显微镜下观察结果一致，直观不能明确判断得可疑结果须镜检,镜下：阴性结果应该就是单个ＲBＣ均匀分布,有 RBＣ凝集状散在得即为弱阳性。
６、6 试验质量检验:取自身血清与自身红细胞用本试剂盒试验方法作自身阴性对照试验,取 IgＧ抗 D 血清与 RhD(+)ＲBＣ用本试剂盒试验方法作阳性对照实验,对照实验符合，试剂有效。
６、7 疑难结果以抗人球蛋白实验(AGT)作最终判断试验,试验操作参照经典ＡGT(在AGT中，加入本试剂盒中得LIM0、８ml 37℃孵育时间可缩短至 10 分钟)。
６、８本试剂盒适宜大多数血型抗体得检测,但对ｋell 血型系统抗体（主要存在白种人群)检测效果较差,由于我国黄种人群中 kｅｌl 血型系统抗体阳性者罕见,因此适合在国内推广。
可补充抗人球蛋白试验,以提高对kｅlｌ血型系统抗体得检出率。
ABO 血型鉴定1、测定原理根据红细胞上有或无Ａ抗原或／与 B 抗原,将血型分为 A 型、B 型、AB 型及O 型４种。
可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定 ABO 血型。
所谓正定型，就是用已知抗—A 与抗—B 分型血清来测定红细胞上有无相应得 A 抗原或／与 B 抗原；所谓反定型,就是用已知Ａ细胞与Ｂ细胞来测定血清中有无相应得抗—A或/与抗—B。
2、标本种类及收集要求2、1 受检者血清；２、2 枸缘酸钠抗凝血或未稍取血，受检者血液制成 5 ％红细胞盐水悬液使用。
２、3 标本出现中度溶血者,为不合格标本,不能用于检测。
3、操作步骤3、1、试管法3、1、１取洁净小试管(内径 10mｍ×６０mｍ)3 支,分别标明抗—Ａ、抗—B 与抗—A十Ｂ，用滴管分别加抗—A、抗—B 与抗—A 十 B 分型血清各ｌ滴（约50 ul)于试管底部,再以滴管分别加入受检者 5％红细胞盐水悬液１滴，混与。
3、1、２另取洁净小试管(内径10mｍ×60mm)3 支,分别标明A、B 与 O 细胞。
用滴管分别加入受检者血清 l 滴于试管底部，再分别以滴管加入 A、B与O 型5%试剂红细胞悬液 l 滴,混与。
3、1、3 立即以 1000r／ｍin 离心 3 mｉn。
3、１、４将试管轻轻摇动,使沉于管底得红细胞浮起,先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。
如内眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。
３、1、5 观察结果时既要瞧有无凝集,更要注意凝集强度，此有助于 A、B 亚型、类 B 或cisAB 得发现。
３、１、6 凝集强度判断标准4+ 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。
3+ 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
２+ 红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。
1＋肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。
±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
MF 混合凝集外观（mixed ｆield)就是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
-表示阴性,镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
3、2 玻片法3、2、１取清洁玻片 1 张(或白瓷板 1 块），用蜡笔划成方格,标明抗－A、抗-B与抗-A 十 B,分别用滴管滴加抗-Ａ、抗-Ｂ与抗-A 十 B 分型血清ｌ滴于标明得方格内，再各加受检者 2％红细胞悬液１滴,混与。
3、2、2 另取洁净玻片一张（或白瓷板 1 块),用蜡笔划成方格,标明 A 细胞、Ｂ细胞与 O 细胞，用滴管各加受检者血清 1 滴,再分别用滴管滴加A、B与Ｏ型试剂红细胞悬液１滴。
3、2、3 将玻片（或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与细胞充分混匀，连续约１5 min,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应;再在低倍镜下观察结果。
4、结果判定ABO 血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗－B 抗－A 十 B A 细胞 B 细胞 O 细胞+ - + A - + -－ + + B ＋ - -- － - O + +-+ ＋ + ＡB - --注:+为凝集;－为不凝集。
5、注意事项:5、1 分型血清必须为批批检试剂,且在有效期内使用;质量性能符合要求。
试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签,用毕后应放置冰箱保存,以免细菌污染。
试剂开封后有效期为一周。
5、2 试剂红细胞以 3 个健康者同型新鲜红细胞混与，用生理盐水洗涤 1 次，以除却存在于血清中得抗体及可溶性抗原。
或使用合格得商品诊断红细胞。
试剂红细胞有效期：自制得为 15 天，商品得为试剂有效期。
试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签,用毕后应放置冰箱保存,以免细菌污染。
试剂开封后有效期为一周。
５、３生理盐水启用后,有效期为二周。
5、4 所有试剂在开封或使用时，必须检查就是否有变质;凡可疑者,必须更换新得试剂进行检测工作。
5、5 试管、滴管与玻片必须清洁干燥,防止溶血。
5、６操作方法应按规定,一般应先加血清,然后再加红细胞悬液，以便容易核实就是否漏加血清。
5、7 按理 IｇM 抗-A 与抗-B 与相应红细胞得反应温度以４℃为最强,但为了防止冷凝集现象得干扰,一般仍在室温(２0—24℃)内进行试验,37℃可使反应减弱。
5、８离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。
5、9 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列得区别。
５、１0 判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误。
5、1１对于可能存在不完全抗原得时候,应在各反应方加入凝聚胺试剂,以检验不完全抗原得存在。
５１2 对于可疑结果,必须更换所用得试剂,重新检测。
５、13 5%红细胞悬液得配制:用生理盐水洗涤红细胞 3 次。
根据下表进行红细胞悬液得配制悬液浓度（%）压积红细胞(滴）盐水(滴）2 1 2ml(40）５１ 0、8mｌ(16）Rh(D)血型鉴定１、实验原理红细胞与抗 D 抗体发生凝集反应表明该细胞有 D 抗原,反之,无凝集现象表明试验得红细胞缺少正常强度得 D 抗原。
2、标本收集与制备无菌操作收集血液标本，收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于 2－8℃。
收集在ＡCＤ、CPD、ＣPD－2Ａ液中得血液标本,不超过 21天仍可进行实验,但就是加 EDTA、肝素与凝集得血液标本,实验应在 2 天内进行。
3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其她所需物品:RｈD(ＩgM）血型定型试剂(单克隆抗体):上海血液生物医药有限责任公司,产品注册号:国药准字 S20０6０018,包装、规格:每盒内装有１支试剂,10ml/支,储存要求:存放 2—8℃,有效期内使用。
４、操作步骤4、1 玻片法：４、1、1 干净玻片上加 1 滴抗D。
4、1、2 再加入1滴4%－５%得被检红细胞悬液。
该红细胞悬液可以就是盐水悬液, 也可以就是悬浮于自身血浆或血清中得红细胞。