存在的问题：SD大鼠行盲肠结扎穿孔术后，由于组织坏死，肠道组织通透性增加，细菌移位，形成脓毒血症，严重者导致多脏器功能失常综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)发生。这是ICU 患者中最常见的死亡原因之一。而UTI能够阻断全身炎性反应综合征(SIRS)／多脏器功能障碍综合征(MODS)的进程，显示出较强的脏器功能保护作用。但针对脓毒症、MODS时微循环障碍导致脏器灌流不足而选择经静脉灌注给药时，有望进一步提高UTI对心、肺、肝、肾功能衰竭的早期诊断提供预警、判断预后提供依据和指标。
乌司他丁（UTI）是从尿中分离纯化出来的一种糖蛋白,具有稳定细胞膜及细胞亚膜、稳定溶酶体膜抑制溶酶体释放、清除自由基、抑制炎症介质释放、改善微循环衰竭状态,抑制蛋白质分解代谢亢进,以及多种蛋白酶活性等药理作用,能够抑制胰蛋白酶、α2糜蛋白酶、透明质酸酶、弹性蛋白酶、磷脂酶A2 和纤溶酶等多种酶活性,并对缺血再灌注损伤有保护作用[9-10].
（一）实验设计目标，拟解决的关键问题
设计目标：对复制SD大鼠脓毒血症模型后使用乌司他丁可以缓解脓毒血症组的心、肺、肝、肾功能症状。
拟解决的关键问题：实验模型的制备。对试验性脓毒血症的模型进行分组与实验结果分析。
（二）实验设计
1、实验动物设计
（1）实验动物的选择
取SD大鼠48只，体重180～220g，雌雄各半。
目的与意义:脓毒血症是机体免疫系统受到强烈刺激，进而引起多种生物级联反应所致，包括炎症反应过程、凝集纤溶系统改变等。在炎性疾病状态下内源性的乌司他丁(UTI)被严重消耗，使其不足以抵抗剧烈炎症的损害，此时提供外源性的UTI，对于保护机体免遭炎性介质的损害十分有必要。
复制脓毒血症模型，直接使用外源性的乌司他丁(UTI)药物尾静脉注射治疗脓毒血症。本实验的目的即在于对探讨UTI在脓毒血症组的防治中其重要器官（如心、肝、肺、肾）在不同治疗时间内的功能变化，具有十分重要的意义。
国内外研究现状：脓毒症( sepsis) 是严重创伤、烧伤及大手术后常见的并发症。目前对脓毒症的研究虽已进入到细胞、分子和基因的水平, 然而,国内外流行病学调查显示患病率呈逐年上升的趋势[1-2]。有国内文献[3]报道, 我国严重脓毒症和多器官功能障碍综合征(MODS) 的死亡人数高达每年100 万人以上。脓毒症发病机制非常复杂, 临床救治十分困难, 涉及感染、炎症、免疫、凝血及组织损害等一系列基本问题, 并与机体多系统、多器官病理生理改变密切相关[4-5]。
3、实验统计设计
实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。
（1）随机：选正常20代以上近交系健康体重相近SD大鼠70只，将70只SD大鼠按体重由小变大编号后，得结果如下：
动物编号：1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1314 15 16 17 18 19 20……….70
从随机数列表抽取n=70的随机数字，将其安排到动物编号下。以动物编号下的随机数字除以7，余数为0的为假手术A组，余数为1的为实验模型B1组，余数为2的为实验模型B2组，余数为3的为实验模型B3组，余数为4的为实验模型C1组，余数为5的为实验模型C2组，余数为6的为实验模型C3组。
4、雌鼠乳头较雄鼠明显
性成熟期：2-3月龄；实配年龄：3.5月龄左右；成熟时体重：雄250g以上，雌150g以上。
发情鉴定：动情期大鼠外阴部肿胀红润，抚摸其身体出现脊柱前凹、抬臀等行为现象。
配种：动情前期交配
交配形式：采用全同胞兄妹交配形式
妊娠诊断：摸胎法、阴道涂片法、外形涂片法、直肠检查法
育种代数：作为亲本的全同胞兄妹（初始动物）记为0代，按雌雄1：1进行交配，所生后代记为第1代，从中又选留满意的一对或几对全同胞兄妹作亲本，按雌雄1：1进行交配，以此类推，直到20代以上。
UTI来源于人体，无免疫原性，安全性高。健康男性30万u/10ml静注后在肾、肝迅速积累,5 min达到峰值，以后迅速下降；消化器官(胃、小肠、结肠、胰、胆囊)给药15-60 min达到峰值，消除半衰期约为40 min，其生物利用度为100％。UTL主要通过肾脏代谢，给药12 h后，绝大部分都通过尿和粪便排出体外[11-12]。
（2）对照：本课题的研究我们采取了真性手术与假性手术之间的对照。
（3）重复：本实验采用的是每实验小组有10只SD大鼠，具有一定的重复性。
（4）统计数据收集：本实验搜集计量资料,实验过程中因麻醉意外，手术失败造模不成功以及未到4h、8h、12h小时内死亡的均弃去不用。实验动物是随机抽取的，重复大量实验也符合统计学的基本原则。
脓毒症是危重症医学研究的热点与难点，具有发病率高、病死率高、住院费用高等“三高现象”。美国每年有近75万脓毒症患者，每日有近500例患者死于重症脓毒症，病死率约为30％，在欧洲每年估计有15万人死于脓毒症[6-7]。
应对脓毒症的巨大挑战已成为国内外医学研究的重大课题。凡脓毒血症者至少伴有1个以上器官功能不全或衰竭,出现低血流灌注或低血压。发病率以老年(年龄> 65 岁) 、原有慢性消耗性疾病及免疫功能低下者较高,尤在重症监护房中多见。病情严重程度通常可采用改良的APACHEⅡ(急性生理学与慢性健康情况评估Ⅱ) 积分进行预测。严重脓毒血症的病死率仍高达35%～45%[8]。
解决问题的思路：本研究以盲肠结扎穿刺法( cecal ligationand puncture, CLP) 复制脓毒血症并作实验对照组和假手术组对照,分别观察记录对脓毒血症动物行使乌司他丁(UTI)静脉注射4h、8h、12h治疗，SD大鼠存活率及相关指标变化的数据分析。
参考文献：
[1]姚咏明,盛志勇,林洪远,等.脓毒症意义及诊断新认识[J].中国危重病急救医学,2004,16(6):321-324.
附表：实验结果相关指标的记录
指标
组别
心脏GαqP11 含量
SD大鼠设施：开放系统
SD大鼠笼具及垫料：采用无毒塑料笼具，垫料选用具良好吸湿性、无毒性、无异味、尘埃少的材料如电刨花，垫料须经高压蒸汽灭菌
SD大鼠饲喂：饲喂小鼠全价营养颗粒饲料，饲料的消毒灭菌应达到相应等级小鼠微生物控制的要求。饲喂采取“少量勤添”的原则，每周加料2-3次，饮水应保证连续不断，每周换水2-3次，垫料每周更换1-2次。
我们选用SD大鼠作为实验动物，有以下几点理由：
1）、SD大鼠易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。
2）、SD大鼠与人的某年龄时期是对应的（SD鼠24月龄相当于人的衰老早期，而且24月龄以上的SD鼠是研究老年病学的首选动物）。
3）、SD大鼠具有繁殖周期短、产仔多、生长快、饲养方便，性成熟早、性周期短、繁殖力强的特点，常用于心血管实验的研究。
乌司他丁不仅对炎症反应过程中造成组织、细胞损伤的毒性介质有拮抗作用，同时还可促进特异性免疫功能恢复，从而对机体器官起到保护作用[13-14]。
国内外已证实乌司他丁对脓毒血症组心、肺、肝、肾功能确有明显保护作用，能降低治疗组多器官功能障碍综合征(M0DS)的发生率及病死率。但是目前还没有文献研究乌司他丁在不同时间点治疗脓毒血症各病变脏器的疗效，即脓毒血症发生后各脏器病变的最坏时间及经乌司他丁治疗后各脏器改善的最佳时期，为临床用药提供依据。
[2]Snowden C,Kirkman E.The pathophysiology of sepsis.CEACCP,2002,2:11-14.
[3]李志军.菌毒炎并治与多器官功能障碍综合征[J].中国中西医结合急救杂志,2004,11(6):435-438.
[4]李文娟,颜亮,李经华等.脓毒症大鼠生命体征变化的低应激连续观察[J].实用医学杂志,2008,24(4):531-533.
机能学实验设计大纲
实验名称：探讨乌司他丁(UTI)在不同时间点治疗脓毒血症的各重要脏器的疗效
课题来源：自选
设计班级：2007级临床医学本科2班
设计人员：张芳
设计日期：2010年3月25日
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成都医学院实验技术教研室
2010年制
一、实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，ห้องสมุดไป่ตู้在的问题，解决问题的思路。
个体选择：选择留繁殖力强，生活力强，特别是目标性状和基因。
保种方法：平行线系统
扩大繁殖生产方法：交通信号灯方法
(5) 饲养管理
SD大鼠环境标准：实验动物饲养室的温度为18-19℃，相对湿度为40%-70%，每小时换气次数为10-20次，噪声在60分贝以下，每立方米空气中氨浓度在14mg以下，工作照度为150-300lx
[7]梁小仲,姚华国,张媛莉.乌司他丁在脓毒症时脏器保护作用的研究进展[J].医学综述,2OO6(8),l2(l6):1008-1010.
[8]侯世荣.脓毒血症的研究进展[J].江苏医药杂志.2001 (6) ,27 (6):444-445.
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[6]杨振林,郑树森,朱峰,等.两种不同途径应用乌司他丁治疗重症急性胰腺炎的疗效观察[J].中华肝胆外科杂志,2OO5,11(2):101-103.