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器材和试剂
❖ 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革 兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试 剂
❖ 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载 玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、 非发酵菌生化编码表等。
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标本的采集
➢ 由临床医师以无菌方法采集脑脊液1-3ml， 置于无菌试管中立即送检。
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检验程序
➢ 3) 抗酸染色：取沉淀做小而集中的涂片，用抗酸 染色后镜检，发现有红色的抗酸杆菌，可报告“找 到抗酸杆菌”。
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脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 2、培养
普通培养：将脑脊液直接或经离心沉淀后，接种 在血平板和巧克力平板上，分别放置在普通培养箱 和5％-10％CO2培养箱中，35℃孵育18-24h。观察 菌落形态，涂片染色观察。
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脑脊液标本常见的分离菌
球菌
革兰阳性细菌
金黄色葡萄球菌、化脓性 链球菌、B群链球菌、肺 炎链球菌、消化链球菌
革兰阴性细菌
脑膜炎奈瑟菌、卡他 布兰汉菌
杆菌
结核分枝杆菌、产单核李 斯特菌
流感嗜血杆菌、大肠 埃希菌、产气肠杆菌、 肺炎克雷伯菌、变形 杆菌、铜绿假单胞菌、 不动杆菌、脑膜炎败 血黄杆菌、类杆菌
脑脊液标本 离心沉淀
革蓝染色 抗酸染色 墨汁染色
血平板 巧克力平板 罗氏培养 沙保弱培养
显微镜观察 初步报告
菌落、形态、生化 血清学鉴定 药敏试验
最终报告
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脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 1、涂片检查：将脑脊液3000r／min离心10-15min， 取沉淀涂片。
➢ 1) 革兰染色镜检：如查见革兰阴性、凹面相对的双球菌， 分布在细胞内或外时，可报告“找到革兰阴性双球菌，位于 细胞内(外)，形似脑膜炎奈瑟菌”；如查见革兰阳性、矛头 状的双球菌，有明显的荚膜存在，可报告“找到革兰阳性双 球菌，形似肺炎链球菌”。进一步用肺炎链球菌全价血清做 荚膜肿胀试验，阳性者报告“荚膜肿胀试验检出肺炎链球 菌”。如查见其他革兰阳性、阴性细菌，则根据细菌形态和 染色性，报告“找到革兰×性×菌”。
其它 新型隐球菌、白色念珠菌 钩端螺旋体
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注意事项
❖ 1、标本采集应在抗菌药物使用前采取。 ❖ 2、引起脑膜炎的细菌都比较娇嫩，容易
死亡或自溶，因此应立即送检并尽快处理， 最好床边接种。
流行性脑脊髓膜炎是法定传染病，从脑脊 液中分离并鉴定出脑膜炎奈瑟菌，应按规定 报告法定部门。从脑脊液中分离到的流感嗜 血杆菌以B型菌为多，能产生TEM型β-内酰胺 酶，对青霉素耐药，纸片法测定常不正确， 需单独测定β-内酰胺酶。
与不分解糖的产碱杆菌鉴别
4
目的要求
❖ 1. 掌握脑脊液标本的细菌学检验和报告方 法。
❖ 2. 掌握不动杆菌的培养特征、主要微生物 特性及鉴定方法。
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器材和试剂
❖ 1、标本：脑脊液标本 ❖ 2、菌种：不动杆菌 ❖ 3、培养基：血平板、中国蓝平板、巧克
力平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培 养基、非发酵菌微量生化管。
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非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶
原来 颜色
淡绿
淡绿
无色 淡绿
淡绿
黄 黄 色
阳性 颜色
黄色
黄色
紫色
蓝色 黄色 红色
黄 色
黄 色
黄红灰红 色色白色
标记为红色的加石腊油
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具体实验操作
第二天的主要操作：
❖ 1. 取出标本分离培养的血平板、巧克力平 板、中国蓝平板观察平板上的菌落形态、 颜色
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具体实验操作
第二天的主要操作：
❖2. 观察半固体培养基
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具体实验操作
第二天的主要操作：
❖3. 观察克式双糖培养基
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具体实验操作
第二天的主要操作：
如果怀疑新型隐球菌感染或直接涂片发现有新 型隐球菌，则接种沙保弱琼脂或血琼脂平板分别于 25℃及35℃培养，一般2-3天长出白色或淡褐色菌落。 非致病性菌落35℃不生长。根据菌落形态、涂片染 色、荚膜和生化反应等进行鉴定。参照 “隐球菌 属”。
如为其他形态的菌落和细菌，则参照相关均属 进行鉴定。
如经3天的培养未见细菌生长，可报告“经3天 培养无细菌生长”。
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注意事项
❖ 3、脑膜炎奈瑟菌对外界环境抵抗力差， 特别对寒冷和干燥敏感，因此要注意将标本 在25-37℃保温，不可放置冰箱冷藏或低温 保存。防止标本干燥和避免日光直接照射。
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具体实验操作
第一天的主要操作：
❖ 一、脑脊液标本 分区画线接种到血平板、巧克力平板、中国蓝平板
❖ 二、提供的菌落 ❖ 1、进行涂片G染色观察细菌形态； ❖ 2、触酶试验、氧化酶试验； ❖ 3、接种于半固体、克式双糖培养基； ❖ 4、接种到各种非发酵菌生化鉴定培养基中； ❖ 三、放入35℃恒温培养箱进行培养
如为中等大小、半透明、灰蓝色、湿润的菌落， 革兰阴性双球菌，氧化酶和触酶均阳性，只分解葡 萄糖和麦芽糖，可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。就 可参照 “奈瑟菌属”的鉴定。
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脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
如在血平板上有草绿色溶血、扁平的小菌落生 长，革兰阳性双球菌，触酶阴性，参照 “链球菌属” 进行鉴定。
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脑脊液标本检验操作流程 及报告方式
➢ 2) 墨汁染色：用墨汁负染，在黑暗的背景中见到 折光性很强的菌体及周围透明的宽大荚膜，有时可 见到长出的单芽，可报告“墨汁负染找到宽厚荚膜 的单芽细胞，形似新型隐球菌”。也可用O.1％甲苯 胺蓝染色法，新型隐球菌菌体呈红色，荚膜不着色， 白细胞深蓝色，红细胞不着色。
脑脊液标本的微生物检查 及不动杆菌的培养鉴定
1
不动杆菌
❖ 革兰阴性球杆菌，单个或成双排列，有时呈 丝状或链状；无芽孢、无荚膜，无鞭毛。
❖ 不动杆菌属的细菌进行革兰染色时不易脱色， 有时易染成革兰阳性，误认为是革兰阳性球 菌，应注意鉴别。
2
3
❖氧化酶: ❖ O/F：O ❖硝酸盐还原: ❖ KIA: K/K ❖ 动力：❖ 枸櫞酸盐利用: + ❖ 注意与形态相似的奈瑟菌鉴别；注意
❖4. 观察生化反应，查表鉴定
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非发酵细菌生化鉴定编码表
1
2
3
4
O-F试验 厌氧 需氧
拘 氧橼 化酸 酶盐
麦 芽 糖
精 氨 酸 酶
精 对
甘 露 醇
木 糖
硝
酸
盐
还 原
酶
DNA
乙 酰 氨 酶