生产车间 抽样日期
细菌总数
班次 检验日期
营养琼脂培养基
A
B
平均数
结果报告数（个/g或ml）
日期：
复核：
日期：
记录表
按照以下原则进行编制： ⑴可以满足检验过程的复现； ⑵可以实现培养基和试剂的溯源及复现其制备过 程； ⑶一页原始记录基本包括该样品的多个常规检验 项目，也就是一份样品的所有微生物检验项目在 一张原始记录上体现。 为了符合实验室资质认定评审的要求，可能会有 点繁，而且基本上没有办法对原始记录作假，因 为记录上体现的内容环环相扣。
（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐 注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸 管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，制 成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序,制10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时， 即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每 个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培 养 基 ( 可 放 置 在 46±10C 水 浴 锅 内 保 温 ) 注 入 平 皿 15ml~20mL，混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有 1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
注意英文表述
菌落总数aerobic bacterial count 大肠菌群coliform bacteria 沙门氏菌salmonella 致泻性埃希氏菌diarrheogenic escherichia coli 霉菌和酵母molds and yeasts 金黄色葡萄球菌staphyloc
菌落形成单位colony form unit 微生物学检验 microbiological examination
讨论1
真菌菌落算不算菌落总数？（请学生比较 新老国标中关于菌落的定义的差异）
讨论2
新国标上菌落总数计算公式上n 分别代表 什么？
（n1 ——第一稀释度（低稀释倍数）平板 个数（含适宜范围菌落数）
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定 标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链 状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链， 可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每 条链作为一个菌落计。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱 内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目,乘以倍数， 即得每g（每mL）样品所含菌落总数。
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜
检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择
➢ 检测菌落总数时,有些菌落难以区别,有没有什么好的试剂,能增加菌 落的可见率？
➢ 我公司做的菌落总数和技术监督局所测的数目存在巨大差别. 是这样的:我公司跟客户采购一批的鸡粉，多次检测此批产品菌落 总数均在5000左右，超过我司的内控标准。但客户检测数目与我 司不符，于是我司把产品送到当地的技术监督局检测，所得结论是 菌落总数为：205个/克。所以我们老总怀疑我们的工作能力，但 问题是在其中一次操作中，我们同时化验两种不同品牌的鸡精，一 种不符合要求，一种可以。
2、检样处理 （1）以无菌操作将检样25g（或25ml）剪碎，放于含有 225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内 预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或 研磨制成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以
8000r/min~100000r/min 的 速 度 处 理 1min ， 做 成 1 ： 10 的 均匀稀释液。
n2 ——第二稀释度（高稀释倍数）平板个 数（含适宜范围菌落数）
讨论3
成片的菌落如何计数？
讨论4
对原始记录表的评价 设计原始记录表
菌落总数的测定
－－平板菌落计数法 菌落总数记录报告产品名称来自生产日期检验依据 培养基
接种 1
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 空白 备注 检验员：
菌落总数的测定
－－出现的实际工作问题
➢ 做菌落总数检测时,发现稀释倍数大的比稀释倍数小的平皿上生长 的菌落数还多,而且空白对照又没长菌,我找不出啥原因？
➢ 我做的菌落总数的测定，是把浓缩的复合芽孢杆菌进行10-8、10-9、 10-10稀释，在涂布法吸取0.1ml的3个浓度的时候，培养皿中长出 来的菌2个10-9长了一大片的菌连在一起，10-8也有一个这样，其 他的几乎不长，究竟怎么会事？