列和质粒复制子的的特 DNA 包 装 到 噬 菌 体 颗 粒 中 所 需 的 有 cos 位点的任何 DNA 分子只要在长度相当于噬菌
殊 类 型 载 体 。 能 像 DNA 序列。黏粒的组成包括质粒复制 体基因组，就可以同外壳蛋白结合而被包装成类似
-DNA 那样进行体外包 起点（colE1），抗性标记（ampr）， cos 噬菌体λ的颗粒。因此，插入柯斯质粒的外源 DNA
点制约的，不存在包装 实施改造、构建人工载体的重点区域。
限制。只感染雄性大肠 ② IG 区只有一个 Bsu I 切点。（2）加
杆菌
入酶切位点，在 IG 区加入单一切酶位
点。M13mp1 在 IG 区插入一个大肠杆
1) 通过裂解过程增殖载体 2)载体与外源 DNA 的酶 切 3) 外源 DNA 与载体的连接 4)重组噬菌体的体外 包装 5) 包装噬菌体颗粒的感染 6)筛选（λ 噬菌体 载体的克隆原理）
（10 kb 通过克隆双链 它具有质粒的复制起点、选择性标记、 肠杆菌 lacZ 基因的 5’-端编码区，可按照 IPTG 显
DNA 能获得同等长度 多克隆位点等，方便 DNA 的操作，可 色反应试验筛选 6. lacZ 基因是置于 lac 启动子的控
Word 资料
.
人工染色 体
的单一单链 DNA 重组操作简便，筛选容 易
菌体颗粒的形成。
E.coli 中 的生长会受到限制的表型，称
作 Spi+ ，即对 P2 噬菌体的干扰敏
感）
M13 噬 菌 体 的 基 因 组 基因间隔区（intergenic region, IG 区）
为单链 DNA。噬菌体颗 基因 II 与基因 IV 之间存在一段 507bp
粒的大小受其 DNA 端 的基因间隔区，含有复制起始位点，是
噬 黏粒 装，并高效转染受体细 位点，因而能象质粒一样转化和增殖。 可大于 40kb。重组的柯斯质粒可象噬菌体λ一样感
菌 载体 胞；能像质粒那样在受 克隆的最大 DNA 片段可达 45kb 。有 染大肠杆菌，并在细菌细胞中复制。
体-
体细胞中自主复制具有 的粘粒载体含有两个 cos 位点，在某种
质
较高容量的克隆能力： 程度上可提高使用效率。
噬菌 粒载 体
M13-DNA 那样体外包 装，并高效转染受体细 胞 装载量比常规的 M13mp 系列要大很多
点、抗生素抗性选择标记和丝状体噬菌 体 DNA 间隔区(含有噬菌体 DNA 复制 起始、终止以及噬菌体颗粒形态发生所 必需的全部顺式作用元件)
个 ampr 基因作为选择记号，便于转化子的选择； 3. 拷贝数含量高 4. 存在着一个多克隆位点区，因 此多种不同类型的外源 DNA 片段，不经修饰便可 直接插入到载体分子上；5.多克隆位点区阻断了大
外，M13 重组分子筛选简便，被 M13 余下的 M13（+）链 DNA 则是从其感染的寄主细胞 的第 13 个核
噬菌体感染的受体细胞生长缓慢，形成 的细胞膜溢出的过程中，被外壳蛋白包装成病毒颗 苷酸 G 突变
混浊斑，易于辨认挑选。而且重组分子 粒的。 （M13 噬菌体产生单双链 DNA 的机制） 成 A，产生了
若干限制性切酶的单一位点（4）具有 在含有抗菌素的培养基（选择培养基）中生长。（抗
较小的分子量和较高的拷贝数。
菌素选择原理）
pSC101 ColE1 pBR322 pUC18 pUC19 TA 载体
噬
克菌
体
隆载
体
载
体
λ噬 菌体
M 13 噬 菌体 载体
其 DNA 两端的 5′末端 (1)基因组大小；去除非必需区，建立外
插入式载体
置换型载体 （取代型载 体）
M13mpn
n 代表系列数
字② 对
M13mp1 的
改进加上常
用的酶切位
点
。
Word 资料
.
菌的 LacZ’（-肽序列)。使克隆的 DNA 的 DNA-蛋白质复合物，然后转移到寄主细胞膜， M13mp2：
片段以特定单链的形式输出受体细胞 同时基因 V 的蛋白质从（+）DNA 链上脱落下来， LacZ’ 5’端
.
克隆载体
基本性质
基本特征（或载体的构建）
原理机制
常用的载体
质粒载体
质粒能利用寄主细胞的 DNA 复制系统进行自 主复制；不相容性；可 转移性（基因工程中采 用非接合性质粒）
（1）具有合适的复制起始位点（ORI） 当带有抗菌素抗性基因的载体进入受体菌后，受体
（2）具有合适的选择性标记基因（3） 菌才能生长。不带有抗菌素抗性基因的受体菌不能
各带有 12 个碱基的互补 源 DNA 片段的克隆或替换位点（2）在
单链，即 cos 位点。有 DNA 的非必需区插入选择标记：lacZ
可替代区，即非必需区。 基因；基因 cⅠ 失活（替代 程控制基因）；Spi 筛选（野生型 λ 噬
这个区域，不会影响噬 菌 体 在 带 有 P2 原 噬 菌 体 的 溶 源 性
粒
45kb；具有与同源性序
杂
列的质粒进行重组的能
合
力
载
能像质粒那样在受体细 噬菌粒载体综合了质粒载体和 M13 噬 1. 具有较小分子量基因组 DNA，可克隆 10kb 的外 pUC118 和
体
胞 中 自 主 复 制 能 像 菌体载体优点，含有 ColEl 复制起始位 源 DNA 片段，并易于进行分离与操作；2. 编码一 pUC119
染色体具有复制功能， 利用染色体的复制元件 来驱动外源 DNA 片段 复制的载体称为人工染 色体载体
越大，混浊斑的混浊度亦越大 但
一 个 EcoR I
M13-DNA 载体的最大缺陷是装载量
切点
小，只有 1.5 kb
考斯质粒是一类人工构 粘粒（cosmid）是带有 cos 序列的质粒。 设计构建的柯斯质粒一般长 4～6kb。其上的 cos 位
建的含有 λ-DNA cos 序 cos 序 列 是 噬 菌 体 DNA 中 将 点的一个重要作用是识别噬菌体的外壳蛋白。凡具
1、以（+）链 DNA 为摸板，合成互补（－）链， 该双链称复制型 DNA（RFDNA）。2、RFDNA 在宿 主细胞能快速增殖，可增加到每个细胞约 200 个拷 贝。3、单链特异的 DNA 结合蛋白结合在（+）链 上，从而阻断了其互补链，即（－）链的合成，这 样，细胞就会不断的合成（+）链 DNA 4、游离出 来的（+）链 DNA 先与基因 V 的编码产物形成特异