3．进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即： 试剂贮存和准备区 标本制备区 扩增反应混合物配制
和扩增区 扩增产物分析区。
4．不同工作区域使用不同的工作服 ( 例如不同的颜色 ) 。工作人 员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
（二）工作区域仪器设备配臵标准
1．试剂贮存和准备区
2-8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器( 覆盖1--1000μ l) ； 移动紫外灯( 近工作台面) ；消耗品： 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头 (带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
核酸检测实验室的规范化管理
一、规范化设臵及管理
( 一) 临床基因扩增检验实验室区域设臵原则
1．临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域： 试剂贮存和准备区；标本制备区； 扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。 （如使用全自动分析仪，区域可适当合并）
2．各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、 物品混用。
? 当靶核酸为RN时A ，逆转录PCR测定失败的常见原因是标本 在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的 RN酶A 的 污染。故建议使用高质量的商品核酸提取试剂。
3. 扩增区
? 下述操作在该区进行：DN或A RN扩A 增。 ? 在巢式PCR测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢
式扩增由较高的危险性，第二次加样必须在本区内进行。 ? 不能从本区再进入任何“上游”区域，可降低本区的气压以避免
气溶胶从本区漏出。 ? 为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。
面区域的可能性
二、质量保证
临床基因扩增检验实验室质量保证涉及到整个基因扩 增检验所有阶段，即测定分析前的标本采集处理、测定中 的核酸提取，扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
（一）标本的采集 （二）标本的稳定化处理 （三）标本的运送 （四）标本的贮存 （五）标本的处理( 核酸提取) （六）靶核酸的逆转录CFIT)和扩增 （七）污染 （八）扩增产物的分析
4. 扩测定。
? 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本
区的物品及工作服将扩增产物带出。
? 本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、
丙稀酰胺、甲醛或同位素等，应注意实验人员的安全防护。
? 本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前
（三）标本的运送
? 标本采集后必须尽快送至实验室。 ? 经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。 ? 用于RN检A 测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻后，
放在干冰中运送。
（四）标本的贮存
? 临床体液标本如血清／血浆等可于 -70℃下长时间贮存。 ? 用于DN测A 定的已纯化核酸样本可在 10 mmo／l L Tris —
3. 扩增反应混合物配制和扩增区
核酸扩增仪；微量加样器( 覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯( 近工作台面) ；消耗品（一次性手套、一次性吸水纸、 耐高压处理的离心管和加样器吸头( 带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品.
4. 扩增产物分析区
基本仪器设备如下： 微量加样器( 覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯；消耗品； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
? 玻璃器皿在使用前应高压处理。
? 临床用于RN（A 如HCVRN）A 扩增检测的血标本建议进行抗凝处理， 并尽快（3小时以内）分离血浆，以避免 RN的A 降解。如未作抗凝 处理，则抽血后，必须在 1小时内分离血清。
（二）标本的稳定化处理
? 用于DN扩A 增检测的标本，应及时送至实验室。
? 用 于 RNA测 定 的 标 本 应 进 行 稳 定 化 处 理 ， 异 硫 氰 酸 胍 盐 (Guanidinethiocyanate，CITC)可使DN酶A 和 RNA酶立即失活， 因此在采集标本时，可将标本材料如血清或血浆按 1：4的比例加 至含有5mo／l L GITC的试管中，从而使血清 ( 浆) 中的RN酶A 不可 逆失活。
2．标本制备区
1-8℃冰箱、- 20℃或- 80℃冰箱；高速台式冷冻离心机； 混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器 (覆盖1--1000μ l) ； 可移动紫外灯( 近工作台面) ；超净工作台；消耗品; 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头 (带滤芯) ； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品； 如需处理大分子DN，A 应备有超声波水浴仪。
2. 标本制备区
? 下述操作在该区进行： 标本保存、核酸（ RN、A DN）A 提取、贮存及其加入至扩
增反应管和测定RN时A cDN的A 合成。
? 为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反 应混合液的反应管。
? 对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭 活程序。
? 样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取 方法。
（九）质量控制
（一）标本的采集
? 常用于基因扩增检测的临床标本包括 EDTA或构橼酸钠抗凝全血或 骨髓、血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。采血液等样本 时，应使用一次性密闭容器，如真空采血管。当使用非密闭采样 系统时，如尿、分泌物和骨髓的采样，必须注意防止来自采样者 的皮屑或分泌物的污染。采样时必须戴一次性手套。
1mmo／l L EDTA缓冲液 (pH7.5—8.0) 中4℃保存。 ? 用于RNA测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中 -80℃或液氮
中贮存。 ? 用乙醇沉淀的核酸样本贮存在 -20℃即可。 ? 用GITC处理的RNA标本在室温可保存 7天。
（五）标本的处理( 核酸提取)
? 标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步 骤，在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板 前，应对其进行充分评价以验证其提取的有效性。
（三）各区操作注意事项
1. 试剂贮存和准备区
? 下述操作在该区进行： 储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
? 在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。 ? 操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 ? 严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。 ? 工作结束后必须立即对工作区进行清洁。 ? 实验室及其设备的使用必须有日常记录。