红细胞血型系统及其检测
完全抗原(antigen,complete)
具有免疫原性、反应原性两种性能的抗原称为
完全抗原。
半抗原 (hapten)
缺乏免疫原性而只有反应原性的抗原称为半抗原。
抗原的基本特征
1、外源性 2、分子量大,结构复杂
3、特异性
免疫原性(immunogenicity)
4、抗原性
{
反应原性(specificity)
直接凝集 direct agglutination 间接凝集 indirect agglutination
IgM抗体造成的直接凝集
间接凝集反应的两个阶段
• 第一阶段
致敏阶段
•
第二阶段
真凝集阶段
IgG抗体借助抗球蛋白试剂产生的间接凝集反应
试管中红细胞凝集强度的判断
红细胞凝集反应结果的判读评分标准
红细胞抗体检测
什么情况下对输血患者做抗体检测? 妊娠史 输血史 近期需要多次输血患者
二、红细胞血型检测
输血前免疫学检查内容
常用的检测技术
(一)、输血前免疫血液学检验
输血前检查分为两个方面,一方面是对供血者进
行的检查,另一方面是对实际 接受输血的患者 (受血者)进行的检查。 输血前检查的目的在于为每一名受血者选择适合 的血液成分,使其有正常的存活时间,并且不引 起受血者本身红细胞临床上的明显破坏
类 似酶性质的一组复杂的血清蛋白系统。各成分均 以不活动的酶原形式存在于血清中,只有被激活 后,把酶原变成酶,才能发挥其生物活性作用,
所以也叫做补体系统。
补体的性质
补体的性质是非特异性,不稳定,易被
紫外线、机械振荡、化学药物以及加热破坏
其活性 。
(三)红细胞抗原抗体反应
抗原抗体反应是机体防御系统功能的一
受血者血样本
血液标本的要求
血液标本必须经鉴定和标记,并和血液 申请单上内容核对、确定 标本必须能代表患者的当前免疫状况 防止血液标本的稀释和溶血 输血前检查最好使用血清,也可以使用 血浆。
每次输血后标本至少保存7天。
为什么输血前检查用血清比血浆更好?
首先,有时血浆中可形成小的纤维蛋白凝块使 认读困难。其次,一些通过补体激活才能反应的抗 体,用血浆不能检出。因为血浆中抗凝剂乙二胺四 乙酸(EDTA)或枸橼酸盐能螯和钙并阻止补体激 活。
4+ 3+ 2+ 1+ W+ 阴性 1个凝块,背景清晰,无游离红细 2~3个凝块,背景清晰,无游离红细 多个小凝块,背景清晰,无游离红细 无数的小颗粒,背景混浊,有游离红细胞 镜下较少凝集,有较多的游离红细胞 肉眼观察不到凝集,镜下全为游离红细胞
抗原抗体反应的特点
高度特异性 可逆性 比例性 两个反应阶段:致敏和凝集阶段
抗原抗体反应的特异性
抗原的功能
抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生体液 免疫(humoral response)或细胞免疫(cellmediated response) 反应。 前者通过浆细胞合成抗体输送到血液或体液
中;后者由淋巴细胞介导,出现延迟性超过敏反
应或排斥移植物的生物效应。
影响抗原免疫原性的因素
6、鉴定器材和试剂血清被污染
Rh血型鉴定可能出现假阴性的原因
1、受检细胞悬液浓度太高,与试剂血清比例
失调。
2、漏加或错加定型试剂
3、观察结果时摇动用力过度,摇散弱凝集。
4、试剂血清保存不当引起变质
5、定型血清的使用方法不当
6、D变异型检测应用抗人球蛋白试验
红细胞血型抗体的分类
按产生的原因和条件大致可分为三类
天然抗体 免疫抗体
natural antibody immune antibody
自身抗体
autoantibody
同种抗体 allo-antibody
按照与相应红细胞是否在盐水中产生凝集
完全抗体(complete antibody)
5、嵌合体血型(开米粒,chimerism )
13、低丙种球蛋白血症
15、年龄因素
14、药物等因素
16、防腐剂因素
17、单克隆定型试剂与人源多克隆定型血清在判读和 分析弱抗原时的差异
技术问题
1、不干净的试管
2、血清与细胞的比例
3、离心速度。
4、 污染的试剂和标本
5、记录结果错误 6、 漏加试剂。 7、弄错标本 8、阳性溶血反应误认为阴性。
IgG
能
不能 能
能 能
难 易
否 是
难 易
IgM 不能
补体 complement
补体是存在于人和动物血清中的一种正 常成分,由球蛋白、糖和磷脂结合而成,约占 血清球蛋白总量的10%。它能补助各种特异性 抗体溶解相应的细菌和细胞。
补体系统
complement system
补体是由20多种血清蛋白成分组成的具有
Rh血型定型
主要鉴定D抗原,定型时应按抗D血清试
剂使用说明进行,并注意有严格的对照试验, 包括抗原的阴性、阳性对照以及试剂对照试 验。
Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因
1、受检红细胞直抗阳性 2、高蛋白试剂引起缗钱状凝集 3、纤维蛋白造成的凝块
4、定型试剂中存在的其它抗体
5、多凝集细胞造成的假阳性
影响红细胞凝集反应的因素
抗原抗体的比例 反应温度 溶液的pH值 孵育时间 离子强度 红细胞间距离
常用红细胞抗原和抗体鉴定试验
生理盐水法 抗球蛋白试验 蛋白水解酶试验 低离子强度试验 聚凝胺试验 凝胶试验 吸收放散试验
saline agglutination test antiglobulin test , Coombs enzyme-treated cell agglutination low ionic- strength solution, LISS polybrene technique gel technique absorption elution test
红细胞血型系统及血型检测
李宝华 临床基础检验学教研室
红细胞血型系统
主要内容: 红细胞血型系统免疫学基础 ABO血型系统 Rh血型系统 其他红细胞血型系统 多凝集红细胞
一、免疫学基础原理
(一) 抗原(antigen)
免疫原(immunogen)是能够刺激机体免疫
系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以 在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞 结合,产生免疫反应。
输血前检查的要求
输入的红细胞
在受血者体内必须
不凝集或不溶血
输入的血浆成份
不导致受血者红细
胞的明显破坏,
输血前检查的主要程序
受血者的病史和血样本等的检查、 核
对及处理。
ABO和Rh定型 抗体筛选和鉴定 交叉配血试验
标签和发血
受血者病史和血样的检查、核对及处理
输血申请单
血标本要求
温型抗体 warm antibody
按照抗体与相应抗原的依存关系
规则抗体
不规则抗体(意外抗体)
按免疫球蛋白的生物化学特性分为五类
IgG
IgM
IgA
IgE
IgD
IgG的四种亚类
IgG和IgM免疫球蛋白的特征
通过 胎盘
盐水 反应
结合 被2-Me 补体 破坏
降低温度 提高反应
被血型物 质中和
• • • • •
种属间的抗原性 同种间的抗原差异 个体间的差别 进入途径
抗原分子及量的大小、抗原性的强弱及刺
激频率
红细胞血型抗原
红细胞血型抗原分布在红细胞膜的表面,有不同 的外部形态,有或没有某一个抗原成份,形成了不
同的血型。
红细胞血型抗原必须是用相应抗体检测到的红
细胞表面抗原,属于遗传性状。
红细胞血型抗原的生化结构
由结合到蛋白或脂上的碳水化合物 carbohydrat 决 定 如: ABO 、 Lewis 、 Hh 、 P、 Ii等
由蛋白的氨基酸序列决定 如: MNSs、 Rh、 Kell、 Kidd等大多数血型抗原
血型系统(blood group system)
由单一基因座位控制,或是由二个或更多的紧密连
欲解决技术问题
应洗涤红细胞3次并配盐水悬液进行重新
正反定型试验并检查红细胞直抗
被检者自身ABO血型问题
1、血清异常
3、异常基因 6、疾病因素导致抗原减弱 8、获得性B 高 10、近期内进行大量血浆置换 11、异常的血浆蛋白 12、意外抗体的存在
2、红细胞致敏
4、近期输血 7、红细胞多凝集现象 9、血型特异性物质过
锁、彼此之间没有重组发生的同源基因控制
血型集合(blood group collection)
抗原是以遗传、生化或血清学的相关性进行组合
高、低抗原频率组 ( high and low frequency antigens )
高频抗原 (high frequency antigens)
为大多数人所具有的血型抗原,表示1000个
人中至少有999人存在此抗原。
低频抗原 (low frequency antigens)
为少数人所具有的血型抗原,表示 1000个人
中最多只有1人有此抗原。又称为私有血型组抗原。
(二)红细胞血型抗体(antibody)
抗体是机体对外来抗原刺激所产生的 一组具有免疫功能的球蛋白,即免疫球蛋
白( immunoglobulin, Ig )。
部分,借以排除外来物质对机体的损害,