同步荧光法测定海水中叶绿素 a 的含量
唐尧基1 游文玮2 陈 莹1 李耀群1
(1. 厦门大学化学化工学院与教育部现代分析科学重点实验室 , 厦门 361005 ; 2. 第一军医大学基础部 , 广州 , 510515)
摘 要 以 N ,N - 二甲基甲酰胺为萃取剂 ,利用荧光激发 - 发射波长差 237 nm ,建立了同步荧光法测定海水 中叶绿素 a 含量的新方法 ,其线性范围为 0～200. 0μgΠL ,检出限为 1. 5μgΠL、灵敏 ,其他常见色素不干扰测定的优点 , 。
取适量叶绿素 a 标准溶液置于 10 mL 容量瓶 中 ,用 N ,N - 二甲基甲酰胺稀释至刻度 ,摇匀 ;采用 荧光分光光度计 ,选择适当的激发和发射波长 ,测定 标样的荧光激发和发射光谱以及同步荧光光谱 。
取不同地点 、不同深度的适量海水 (015～2L ) , 加入体积为水样 5 %的饱和碳酸镁溶液 ,用 0145μm 滤膜减压过滤 ,使海水中的浮游植物截留在滤膜上 , 从滤膜上取下后风干 ,再加入 10mL N ,N - 二甲基 甲酰胺萃取剂 ,盖好 ,避光放置 015h ,即可取上清液 进行同步荧光法测定 。
fifty peaks separated , 41 were identified , making up 93. 44 % of t he total content . The analytical result s demon2 st rate t hat t he main constit uent s of t he essential oil of Eu patori u m li n dlcyan u m Dc. are caryop hyllene oxide ,β2 pinene and hexadecanoic acid.
E - mail : yqlg @xmu. edu. cn , 邮编 : 361005
2004 年第 3 期 分 析 仪 器
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胺配制成 2. 0 mgΠmL 的储备液 ,放置冰箱保存 ;N ,N - 二甲基甲酰胺 (上海试剂一厂) ;碳酸镁 ;实验所用 试剂均为分析纯 。 2. 2 实验方法
24 分 析 仪 器 2004 年第 3 期
of Pharm aceutical an d B iological Prod ucts , Beiji ng , 100050) The essential oil of Eu patori u m li n dlcyan u m DC. f rom Jiangsn Province was analyzed by GC2MS. Of t he
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂 F - 4500 型荧光分光光度计 (日本日立公司) ,
扫描速度 240 nmΠmin , 带通 5 nm ; 0. 45μm 醋酸纤 维滤膜 (上海半岛实业有限公司净化器材厂) 。
叶绿素 a ( Sigma 公司) : 用 N , N - 二甲基甲酰
基金项目 : 教育部优秀青年教师资助计划项目 (2001 - 39) 和福建省自然科学基金资助项目 ( E0110008) 。 作者简介 : 唐尧基 ,男 ,1977 年出生 ,博士研究生 ,主要从事分子发光分析工作 。 联 系 人 : 李耀群 ,女 ,1964 年出生 ,教授 ,博士生导师 ,厦门大学化学系 ,主要从事分子发光分析工作 。电话 : (0592) 2185875
关键词 同步荧光 叶绿素 a 海水
1 引 言
海水中叶绿素的含量是海洋生态学中必不可少 的检测项目 ,由叶绿素 (通常为叶绿素 a) 的含量可推 算出海水中浮游植物的总量 ,叶绿素含量还是反映 海洋生态系统中初级生产力的最简便有效的指标 , 对估计海洋生产力有着重要意义[1 ,2] 。此外 ,海水中 叶绿素的含量与海洋渔业及海水养殖业有着密切关 系 ,其分布和变化与海洋环境理化因子有一定的相 关性 。因此 ,准确灵敏地测定叶绿素的含量 ,有利于 海洋渔 业 和 养 殖 业 的 发 展 以 及 海 洋 生 态 环 境 的 保 护 。海水中叶绿素 a 的测定方法主要有分光光度 法[3 ,4 ] 和荧光分析法[5 ] 。前者灵敏度较差 ,存在其他 色素干扰测定的问题 。现在多用荧光法 。测定时 , 先用滤膜过滤海水 ,使海水中含活体叶绿素的各种 浮游植物保留在滤膜上 ,再用适当的溶剂将叶绿素 萃取出来 ,然后利用叶绿素 a 所具有的天然荧光进 行测定 。但采用常规的荧光法 ,因为叶绿素 a 的荧 光激发和发射光谱与其他色素的光谱严重重叠 ,而 干扰测定 ,因此常常需要采用多谱段[7] 或其他技术 。
的叶绿素 b 对叶绿素 a 同步荧光光谱测定的影响 , 结果如图 2 虚线所示 。从图中可以看出 ,在实验条 件下 ,叶绿素 b 的存在对叶绿素 a 的光谱形状和强 度几乎没有影响 。在Δλ= 237 nm 时 ,测定灵敏度 高 ,故本实验选用 237 nm 作为叶绿素 a 同步扫描的 波长差 。
同步荧光法是一种新型荧光分析技术 。该方法 同时扫描荧光分光光度计的激发和发射两个单色器
波长 ,由测得的荧光强度信号与对应的激发波长 (或 发射波长) 构成光谱图 。与常规荧光法相比 ,同步荧 光法能够简化光谱 ,减少瑞利散射和拉曼散射的干 扰 ,使谱峰变窄 ,从而提高了测定的选择性和灵敏 度[7 - 10 ] 。黄贤智等[7 ] 建立了叶绿素 a 和叶绿素 b 的 同步荧光分析法并用于菜叶中两种色素的测定 ;朱 明远等[10] 应用同步荧光法分析了浮游植物中的叶绿 素 。同步荧光法用于海水中叶绿素 a 的测定尚未见 文献报道 。此外 ,叶绿素的分析常以丙酮为萃取剂 , 其耗时长且有可能提取不完全 ,新近出现了更合适 的叶绿素萃取剂[11] 。本文以 N ,N - 二甲基甲酰胺 作为高效萃取剂[11] ,采用同步荧光法建立了测定海 水中 叶 绿 素 a 含 量 的 新 方 法 , 其 线 性 范 围 为 0 ～ 200μgΠL ,检出限为 1. 5μgΠL 。