叶绿素a与叶绿素b含量的测定
实验目的和意义
• 叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重 要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。 叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能 的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用)， 因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关， 在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加 而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态 的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低 温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的 含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因 此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的 光合生理与逆境生理具有重要意义。
叶绿素b含量(mg/g鲜重)＝0.1Cb 总叶绿素含量(mg/g鲜重)＝0.1CT
讨论：
1． 叶绿素在兰光区的吸收峰高于红光区 的吸收峰，为何不用兰光区的光吸收来 测定叶绿素的含量。
2． 计算叶绿素a与叶绿素b含量的比值， 可以得到什么结论？
3． 比较阳生植物和阴生植物的叶绿素a和 叶绿素b的含量以及比例，可以得到什么 结论？
实验仪器及材料
• 实验材料：
– 菠菜或其它绿色植物
• 实验仪器及试剂：
– UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器； 研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸； 丙酮；石英砂；CaCO3；
实验步骤
1. 提取叶绿素
选取有代表性的菠菜叶片数张，于天平上称取0.5g， （也可用打孔器打取一定数量的叶圆片，计算总 的叶面积），剪碎后置于研体中，加入5ml 80%丙 酮滤，斗少过许滤到Ca1C0Om3l和量石筒英中砂，。注仔意细在研研磨钵成中匀加浆入，少用量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量 筒内，并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀， 用移液管小心抽取5ml转入25ml量筒中，再加入 80%丙酮定容至25ml（最终植物材料与提取液的 比例为W：V＝0.5：50＝1：100，叶色深的植物 材料比例要稀释到1：200）。
• A663=82.04Ca+9.27Cb （1）
• A645=16.75Ca+45.60Cb （2）
• 公式中Ca为叶绿素a的浓度，Cb为叶绿素 b浓度（单位为g/L），82.04和9.27 分 别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸 收系数（浓度为1g/L，光路宽度为1cm时 的吸光度值）；16.75和45.60分别是叶绿 素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数。
即混合液在某一波长下的光吸收等于各 组分在此波长下的光吸收之和。Βιβλιοθήκη 将上式整理，可以得到下式：
Ca=0.0127A663-0.00269A645 （3） Cb=0.0229A645-0.00468A663 （4） 将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为：
Ca=12.7A663-2.69A645 （5） Cb=22.9A645-4.68A663 （6） CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 （7） CT为叶绿素的总浓度
2. 测量光吸收
利用722分光光度计或UV1700分光光度计，分 别测定叶绿素提取液在645nm和663nm下的 吸光度。
结果分析
将测得的数值代入到公式（5）（6）（7） 中，计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿 素的浓度。最后要计算出单位叶片鲜重 中叶绿素的含量：
叶绿素a含量(mg/g鲜重)＝Ca×50ml（总体积 数）×1ml/1000ml/L ÷0.5g=0.1Ca
实验原理
• 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b， 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。