•解析： 解析： 解析 （1）试管中有人的淋巴细胞和小鼠骨髓 ） 瘤细胞，在促溶剂的作用下，可能出现以下3 瘤细胞，在促溶剂的作用下，可能出现以下 种细胞的融合情况， 种细胞的融合情况，人的淋巴细胞和淋巴细胞 融合，小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合， 融合，小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合， 人的淋巴细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合， 人的淋巴细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合，实验 需要的是第3种细胞 即杂交瘤细胞； 种细胞， 需要的是第 种细胞，即杂交瘤细胞； （2）要将杂交瘤细胞分离出来，可以在 ）要将杂交瘤细胞分离出来， 培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞； 培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞；加 入氨基嘌呤后， 合成途径阻断， 入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有 合成 合成途径阻断 仅有D合成 途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能 增殖， 增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂 种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成 种细胞中可以利用淋巴细胞中的 途径合成 DNA而增殖。 而增殖。 而增殖
3、整个制备过程为何要经过两次筛选? 整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 杂交瘤细胞 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只 有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养 杂交瘤细胞的情况下开始培养， 有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后 再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得 单个杂交瘤细胞 来的， 来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一 特异性强的单克隆抗体。 的，特异性强的单克隆抗体。 这里的单克隆的确有单个细胞克隆的含 这里的单克隆的确有单个细胞克隆的含 单克隆的确有单个细胞 只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂 义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂 交瘤细胞。 交瘤细胞。
植物、 植物、动物细胞融合的比较
比较项目 原理 融合前处理方法 植物体细胞杂交 动物细胞融合
诱导方法 用 途
植物、 植物、动物细胞融合的比较
比较项目 原理 融合前的处理方法 诱导方法 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 物理法（离心、 物理法（离心、振 电刺激） 荡、电刺激） 化学法（聚乙二醇） 化学法（聚乙二醇） 用 途 获得杂种植株 动物细胞融合 细胞膜的流动性 使细胞分散后诱 导细胞融合 物理、 物理、化学方法 同左） （同左） 灭活的病毒 主要用于制备 单克隆抗体
4、细胞融合后培养液中有几种细胞 、 B BB B瘤 瘤瘤 瘤 瘤
单克隆抗体的 应用
小结
动物细胞融合的原理和诱导方法 单克隆抗体制备过程 一个诱导细胞融合的新方法－－灭活的病毒 一个诱导细胞融合的新方法－－ 三个“ 三个“一”
一个新细胞－－ 一个新细胞－－
杂交瘤细胞
特异性强、 单克隆抗体 ：特异性强、灵敏度高的优势 一个优势－－ 一个优势－－
单克隆抗体
视频\单克隆抗体的制备 视频 单克隆抗体的制备.flv 单克隆抗体的制备
思考： 思考：
1、本过程利用了哪些技术？ 、本过程利用了哪些技术？
细胞融合技术和动物细胞培养技术
2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 细胞融合？
这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传 双亲细胞 物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力 细胞分泌抗体的能力， 物质，不仅具有 细胞分泌抗体的能力，而且还有 无限增殖的本领 的本领， 无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体
2、特点： 特异性强、灵敏度高 、特点： 特异性强、
遗憾的是… … 单克隆抗体制备过程？ 单克隆抗体制备过程？
单克隆抗体制备 过程
单克隆抗体制备过程
注射抗原 B淋巴细胞 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选， 筛选，继续培养 足够数量的、 足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群 体外培养、举例说出动物细胞融合的原理和 、 应用 2、单克隆抗体的制备和应用 、
一、动物细胞融合
1、概念： 、概念：
2、过程： 细胞 、过程： 细胞A
物理法 化学法
细胞B 细胞
仙台病毒
灭活的病毒
杂种细胞
病毒颗粒 细胞核 细胞核
用
灭活的病毒
诱导动物细胞融合过程
思考讨论： 思考讨论： 1、灭活的病毒诱导细胞融合的原理是： 灭活的病毒诱导细胞融合的原理是： 2、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？ 为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？
•已知细胞合成 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中 两条途径， 已知细胞合成 有 和 两条途径 其中D 途径能被氨基嘌呤阻断， 途径能被氨基嘌呤阻断，人淋巴细胞中有这两 的合成途径， 种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠 的合成途径 但一般不分裂增殖。 骨髓瘤细胞尽管没有S途径 途径， 骨髓瘤细胞尽管没有 途径，但能不断分裂增 将这两种细胞在试管中混合， 殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇 促融，获得杂交瘤细胞，请回答： 促融，获得杂交瘤细胞，请回答： （1）试管中除融合的杂交瘤细胞外，还 ）试管中除融合的杂交瘤细胞外， 种融合细胞。 有_____________种融合细胞。 种融合细胞 （2）设计一方法（不考虑机械方法）， ）设计一方法（不考虑机械方法）， 从培养液中分离出杂交瘤细胞，并说明原理。 从培养液中分离出杂交瘤细胞，并说明原理。 方法： 方法： 原理： 原理：
3、B淋巴细胞有什么特点？ 、 淋巴细胞有什么特点 淋巴细胞有什么特点？ ）．B淋巴细胞受抗原刺激 抗原刺激后 （１）．B淋巴细胞受抗原刺激后，可 以产生抗体 抗体。 以产生抗体。 ）．动物体内的 动物体内的B （２）．动物体内的B淋巴细胞可以产 百万种以上的抗体 的抗体， 生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的 抗原具有特异性免疫作用。 抗原具有特异性免疫作用。 ）．每一个淋巴细胞只能产生一 每一个淋巴细胞只能 （３）．每一个淋巴细胞只能产生一 种抗体。 种抗体。
教学目标巩固
1.动物细胞工程技术的基础是：（ Ｃ 动物细胞工程技术的基础是：（ 动物细胞工程技术的基础是 A．动物细胞融合 ． B．胚胎移植 ． C．动物细胞培养 ． D．核移植 ． ）
教学目标巩固
２．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的 比较中， 比较中，正确的是 （ Ｂ ） A．结果是相同的 ． B．杂种细胞的形成过程基本相同 ． C．操作过程中酶的作用相同 ． D．诱导融合的手段相同 ．
•变式训练 变式训练 •生产单克隆抗体时，要在培养液中加入某种试 生产单克隆抗体时， 生产单克隆抗体时 剂才能筛选出杂交瘤细胞， 剂才能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂 •A．能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制 ．能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的 复制 •B．能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 ． •C．选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 ．选择性抑制骨髓瘤细胞的 复制 •D． 能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的 ． 合成
单克隆抗体
二、单克隆抗体
1、什么是抗体？其本质是什么？ 、什么是抗体？其本质是什么？
抗体是机体受抗原刺激后产生的、 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生 特异性结合的具有免疫功能的球蛋白 球蛋白。 特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 抗体是从何来的？ 淋巴细胞产生抗体。 抗体是从何来的？B淋巴细胞产生抗体。 3、B淋巴细胞有什么特点？ 、 淋巴细胞有什么特点 淋巴细胞有什么特点？
单克隆抗体及特点： 单克隆抗体及特点：
单克隆抗体及特点： 单克隆抗体及特点： 特点
1、单克隆抗体： 、单克隆抗体：
由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（ 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克 无性繁殖 ），形成基因型相同的细胞群 形成基因型相同的细胞群， 隆），形成基因型相同的细胞群，这一 细胞群所产生的化学性质单一 性质单一、 细胞群所产生的化学性质单一、特异性 的抗体称为单克隆抗体。 强的抗体称为单克隆抗体。
教学目标巩固
单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 ３. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和 淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A． ②④ ． C． ①②③④ ． B．①③⑤ ． D．②③ ．