实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法
一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作
二、原理
茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
三、仪器与试剂
仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
四、测定步骤
1、供测试液的准备：
准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：
取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
同时做空白测定。
五、结果计算
X=
)
(
12
0.005820.318
m V V
A B
-⨯ω⨯
⨯
式中：X—茶多酚的含量，% ，B—空白消耗的高锰酸钾毫升数，mL
A—样品消耗的高锰酸钾毫升数，mL ω--高锰酸钾的浓度，%
m—样品的质量g，V1—测定用供测试液的体积，mL ，V2--供测试液的体积，mL
实验三茶叶中茶多酚含量的测定——酒石酸铁比色法
一、实验目的：
1、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。
2、进一步熟悉721－分光光度计的使用。
二、原理：
茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20％～35％，由约30种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。
按其化学结构分为四类：（1）儿茶素类，属黄烷醇类；（2）黄酮及黄酮醇类；（3）花白素及花青素，即羟基-［4］-黄烷醇及其钾盐；（4）醋酸及缩酚酸类。
其中以黄烷醇类化合物最重要（占多酚的80％左右）。
纯儿茶素一般为白色无定形粉末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。
茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。
对热、酸较稳定，2%的溶液加热至120 ℃并保持30min ，无明显变化。
在碱性条件下易氧化变质。
实验表明，茶多酚清除活性氧自由基作用的活性，为等量维生素C 的493倍，且能有效消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。
还有研究表明，茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色葡萄球菌等有害菌的作用；具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很好的效应，是一种有开发前景的天然抗氧化剂。
1988年7月我国已批准茶多酚作为食品添加剂。
国内已建立了茶多酚工业化生产线，并开发研制出了茶多酚的第二代产品即儿茶素（TC ）。
茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。
本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。
酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。
因此可以用比色方法测定。
该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。
三、仪器与试剂：
仪器：分光光度计
试剂：
（1）酒石酸铁溶液：称取 FeSO 4·7H 2O 1.000g ，含 4个结晶水的酒石酸钾钠5.000g ，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至1000mL
（2）pH7.5的磷酸缓冲液：60.2g Na 2HPO 4·12H 2O ，5.00gNaH 2PO4·2H 2O ，加蒸馏水溶解后．用蒸馏水稀释至1000mL ．
四、步骤：
（l ）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品1g 于200mL 三角烧瓶中，加入沸水80mL ，在沸水浴中浸提30min ，然后过滤、洗涤，滤液倒人100mL 容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。
（2）测定：吸取样品溶液 1mL 于 25mL 容量瓶中，加蒸馏水4mL ，加酒石酸铁溶液5mL ，摇匀，再加入pH7.5磷酸缓冲液稀释至刻度。
以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。
选择540nm 波长和1cm 的比色杯测定吸光度。
五、计算：
式中：ω—茶多酚的含量，%，A —样品溶液的吸光度值，T —样品溶液的总体积，mL
V —测定用样品溶液的量，mL ，m —样品质量，g
3.913—用1cm 比色杯，当吸光度为1.0时，试液中茶多酚的浓度为3.913mg/mL
六、说明及注意事项：
1、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。
3.913100%1000A T V m
ω⨯=⨯⨯⨯
2、样品溶液制备中的注意事项：
（1）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接取样测定。
（2）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混匀的样液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混匀，放置15min，用水定容至刻度，过滤。
（3）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液100mL于250mL的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热10min，以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原来的质量，摇匀，备用。
测定
准确吸取试液1 ml，注人2 5 m L的容量瓶中，加水4 ml和酒石酸亚铁溶液5 ml，充分混合，再加p H 7 . 5 磷酸盐缓冲液至刻度，用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度( A)。