《基础取0.4％TTC溶液0.2mL 放入大 试管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀， 则立即产生红色的TTF 。此溶液浓度为每毫升含有 TTF80μg。分别取此溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、 1.50mL、2.00mL置10mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至 刻度，即得到含TTF20μg、40μg、80μg、120μg、 160μg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参照，在485nm波 长下测定吸光度，绘制标准曲线。
上部分有何关系 ?
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八、作业
1、了解TTC法测定根系活力与其它方法相比有什 么优点。 2、完成此次实验报告。
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四、操作步骤
1、定性测定
(1)配制反应液把1%TTC溶液、0.4 mol/L的琥珀酸和磷 酸缓冲液按 1:5:4比例混合。
(2)把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入 三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处 放1～3h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根 都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
2、掌握根系活力测定的原理与方法；
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二、实验原理
氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化电位为80mV 的氧 化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红 色而不溶于水的三苯甲(TTF)，如下式：
生成的三苯甲(TTF)比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所 引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到 增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示 脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
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根系活力的测定
基础生物学实验（三）
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一、实验目的
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的 生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及 产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植 物营养研究提供依据。 教学目的：
1、理解植物根系活力的内涵及其对植物营养研 究的意义；
（3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙 酯3～4mL，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液移入刻 度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，皆移入刻 度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10mL，用分光光度计 在波长485nm下比色，以空白试验作参照测出吸光度，查 标准曲线，即可求出TTC原量。
4. 磷酸缓冲液(1/15mol/L，pH7.0)。 5. 1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL，边 搅拌边加入盛有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000mL。
（三）仪器设备 小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5mL1支、10mL1支、
5mL3支，刻度试管6支，分光光度计，电子天平，温箱， 试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
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（2）称取根尖样品0.5g，放入小烧杯中，加入0.4%TTC溶 液和磷酸缓冲液(pH7.0)各5mL，使根充分浸没在溶液内， 在37℃下暗保温1～2h，此后立即加入1mol/L硫酸2mL ， 以停止反应。(与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加 根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步 骤同上)。
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三、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料 水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂 1. 乙酸乙酯(分析纯)。 2. 次硫酸钠(Na2S2O4，分析纯)，粉末。 3. 1%TTC溶液：准确称取TTC1.0g ，溶于少量水中，
定容到100mL。用时稀释至需要的浓度。
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五、计算结果 根系活力=
[mgTTF/（g.h）]
式中：C ——四氮唑还原量，μg。 W——根重，g 。 h——时间，h 。
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六、注意事项 根系应吸干水分但不能用力挤压伤及细
胞，才能测定准确。
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七、思考与问题 为什么要测定根系活力 ? 植物的根与地