·874·药学学报Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (7): 874−878骨碎补中的两个新酚酸类化合物梁永红, 叶敏*, 张灵芝, 李卉芳, 韩健, 王宝荣, 果德安*(北京大学药学院天然药物与仿生药物国家重点实验室, 北京 100191)摘要: 为了研究骨碎补的化学成分, 采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱及半制备高效液相色谱等技术, 从中药骨碎补的70%乙醇提取物中分离得到9个酚酸类化合物。

其结构经1H NMR、13C NMR、2D NMR、HR-ESI-MS等谱学方法分别鉴定为4, 4'-dihydroxy-3, 3'-imino-di-benzoic acid (1)、原儿茶酸 (protocatechuic acid,2)、没食子酸 (gallic acid, 3)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid, 4)、咖啡酸 [(E)-caffeic acid, 5]、ethyl trans-3, 4-dihydroxycinnamate (6)、咖啡酸4-O-β-D-葡萄糖苷(caffeic acid 4-O-β-D-glucopyranoside, 7)、对-香豆酸4-O- β-D-葡萄糖苷(p-coumaric acid 4-O-β-D-glucopyranoside, 8) 和23(S)-12-O-caffeoyl-12-hydroxyllauric acid glycerol ester (9)。

其中, 化合物1和9为新化合物, 化合物3、4、6为首次从槲蕨属植物中分离得到。

关键词: 骨碎补; 槲蕨; 酚酸; 23(S)-12-O-caffeoyl-12-hydroxyllauric acid glycerol ester; 4, 4'-dihydroxy-3, 3'- imino-di-benzoic acid中图分类号: R284.1 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2010) 07-0874-05Two new phenolic acids from Drynariae RhizomaLIANG Yong-hong, YE Min*, ZHANG Ling-zhi, LI Hui-fang, HAN Jian, WANG Bao-rong, GUO De-an* (The State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University,Beijing 100191, China)Abstract: To study the chemical constituents of Drynariae Rhizoma, nine phenolic acids were isolated from a 70% ethanol extract by using a combination of various chromatographic techniques including column chromatography over silica gel, ODS, Sephadex LH-20, and semi-preparative HPLC. By spectroscopic techniques including 1H NMR, 13C NMR, 2D NMR, and HR-ESI-MS, these compounds were identified as 4, 4'- dihydroxy-3, 3'-imino-di-benzoic acid (1), protocatechuic acid (2), gallic acid (3), p-hydroxybenzoic acid (4),(E)-caffeic acid (5), ethyl trans-3, 4-dihydroxycinnamate (6), caffeic acid 4-O-β-D-glucopyranoside (7),p-coumaric acid 4-O-β-D-glucopyranoside (8), and 23(S)-12-O-caffeoyl-12-hydroxyllauric acid glycerol ester (9), separately. Among them, 1 and 9 are new compounds, and 3, 4, and 6 were isolated from Drynaria species for the first time.Key words: Drynariae Rhizoma; Drynaria fortunei; phenolic acids;23(S)-12-O-caffeoyl-12-hydroxyl lauric acid glycerol ester; 4, 4'-dihydroxy-3, 3'-imino-di-benzoic acid骨碎补为水龙骨科槲蕨属植物槲蕨Drynaria fortunei (Kunze.) J. Sm.的干燥根茎, 性温, 味苦, 入肾、肝二经, 具有补肾强骨、续伤止痛的功效[1]。

用收稿日期: 2010-01-08.基金项目: 教育部创新团队计划 (985-2-063-112); 北京大学医学部985项目 (985-2-119-121).*通讯作者Tel / Fax: 86-10-82802700,E-mail: yemin@ or gda@ 于治疗肾虚腰痛, 耳聋、耳鸣, 牙齿松动, 跌扑闪挫, 筋骨折伤; 外用治疗斑秃、白癫风。

国内外文献报道槲蕨的化学成分主要有黄酮类[2–6]、三萜类[7–9]及苯丙素类化合物[10], 也有学者利用GC-MS分析了其挥发油成分[11]。

为了进一步寻找其生物活性成分, 作者对中药骨碎补的化学成分作了进一步的研究。

采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及半DOI:10.16438/j.0513-4870.2010.07.004梁永红等: 骨碎补中的两个新酚酸类化合物·875·制备高效液相色谱等方法从中药骨碎补的70%乙醇提取物中分离得到9个酚酸类化合物, 分别鉴定为4, 4'-dihydroxy-3, 3'-imino-di-benzoic acid (1)、原儿茶酸(protocatechuic acid, 2)、没食子酸 (gallic acid, 3)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid, 4)、咖啡酸[(E)- caffeic acid, 5]、ethyl trans-3, 4-dihydroxycinnamate (6)、咖啡酸4-O-β-D葡萄糖苷(caffeic acid 4-O-β-D- glucopyranoside, 7)、对-香豆酸4-O-β-D葡萄糖苷(p- coumaric acid 4-O-β-D-glucopyranoside,8)和23(S)-12- O-caffeoyl-12-hydroxyllauric acid glycerol ester (9)。

化合物1无色片状结晶(甲醇),mp293～295℃。

由HR-ESI-MS m/z: 312.0477 [M+Na]+给出分子式为C14H11NO6, 不饱和度为10。

红外光谱显示该化合物结构中含有仲胺基 (3 391 cm−1)、酚羟基(3 300 cm−1)、羧基 (1 685 cm−1) 和苯环 (1 601、1 537、1 422 cm−1); 紫外光谱在234 nm和298 nm处有最大吸收, 提示分子中有长共轭系统。

1H NMR (600 MHz, CD3OD) (表1) 显示有3个芳香质子信号: δ 7.83 (1H, d, J = 1.8 Hz, Hx)、7.44 (1H, dd, J=1.8, 8.4 Hz, H B)和6.83 (1H, d, J = 8.4 Hz, H A), 组成一个ABX系统; 13C NMR (150 MHz, CD3OD) 数据(表1) 显示7个碳原子信号, 其中6个芳环碳原子(δ152.9、132.6、124.6、123.1、118.5、115.0)和1个羧基碳原子(δ170.4)。

根据HSQC 谱, δ 7.83 (Hx)与δ 118.5、7.44 (H B)与δ124.6、6.83 (H A) 与115.0相关, 其他碳信号则为季碳。

由高分辨质谱所确定的分子式及1H NMR、13C NMR数据推测该化合物为一对称结构分子, 对称单元含有3个取代基 (R1、R2和R3), 分别为一个羧基、一个羟基及一个含氮取代基(图1A)。

在其HMBC谱中, 从δ 7.83 (Hx)出发的二键和三键氢碳相关有两种模式(图1A、图1B), 其中δ7.83 (Hx) 与取代基上的羧基相关, 这表明羧基取代基可能为R1或R3; 而从δ7.44 (H B) 出发的二键和三键氢碳相关只有一种模式(图1C), 其中δ 7.44 (H B) 也与取代基上的羧基相关; 以上相关数据表明, 取代基R3为羧基。

同样, 从δ 7.83 (Hx) 出发的二键和三键相关中, δ 7.83 (Hx) 与连氧芳碳δ152.9相关; 而从δ7.44 (H B) 出发的二键和三键相关中, δ7.44 (H B) 也与连氧芳碳δ152.9相关; 以上相关数据表明, 取代基R2为羟基。

根据以上数据推定R1为含氮取代基, 从而最终推定化合物1的结构如图1D所示, 为一个新的亚胺类化合物, 命名为4, 4'- dihydroxy-3, 3'-imino-di-benzoic acid。

Table 11H and 13C NMR spectral data for compound 1 (CD3OD,J in Hz)No. δHδC HMBC1 − 123.12 7.83(1H,d,J = 1.8, H-2) 118.5 C-1, 3, 4, 6, 73 − 132.64 − 152.95 6.83(1H,d,J = 8.4, H-5) 115.0 C-1, 3, 4, 66 7.44 (1H, dd, J = 1.8, 8.4, H-6) 124.6 C-1, 2, 4, 5, 77 − 170.41' − 123.1 2' 7.83(1H,d,J = 1.8, H-2') 118.5 C-1', 3', 4', 6', 7' 3' − 132.6 4' − 152.9 5' 6.83(1H,d,J = 8.4, H-5') 115.0 C-1', 3', 4', 6' 6' 7.44 (1H, dd, J = 1.8, 8.4, H-6') 124.6 C-1', 2', 4', 5', 7'7' − 170.4 化合物9白色无定形粉末(甲醇), mp 102～104 ℃。