二、结果观察：
１、菌落形态描述: 分别描述1#、2#、3#、4#、5#标本在SS、Mac上的
菌落形态。（可疑菌落与正常菌群菌落分别描述）
2、革兰染色： 3、触酶试验： 4、氧化酶试验： 5、细菌分纯：挑取生长于SS平板、MaC平板中的可疑
菌落3～5个分别接种3～5支KIA。37℃培养18—24小 时后，观察结果。
伤寒杆菌及其它沙门菌、志贺菌、弯曲菌、致病大肠埃希菌、霍 乱弧菌、副溶血弧菌 、气单胞菌、邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森 菌
白假丝酵母菌
病毒
轮状病毒
粪便标本的检验程序
粪便标本或肛拭子标本
直接涂片
革兰染色 抗酸染色
分离培养
（SS、MaC、TCBS、碱性 蛋白胨平板）
35℃18～24h
菌落形态、革兰染色
氧化酶试验
• 实验器材：
1、标本：已增菌模拟粪便标本1#、2#、3#、4#、5#。 2、培养基：SS、MaC、 KIA、蛋白胨水、枸橼酸盐斜面、尿素、苯丙
氨酸斜面、硝酸盐蛋白胨水、甘露醇半固体培养基。 3、试剂：革兰染液、氧化酶试剂、3%H2O2、靛基质试剂、甲基红试
剂、10%FeCl3、硝酸盐还原试剂甲液、硝酸盐还原试剂乙液。 4、诊断血清：
• 肛拭子法：不易获得粪便的患者或作厌氧菌培养时，常采用此法。将 无菌棉拭子用无菌生理盐水湿润后，插入肛门约4～5厘米（幼儿约 2～3厘米）处，轻轻旋转，擦取直肠表面粘液后取出，置无菌试管内 送检。除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。
• 疑似痢疾患者应在发病初期、用药前采取标本；疑似伤寒患者应在发 病2～3周内采集粪便标本。
• 志贺菌属：若生化反应结果相符，则作玻片凝集反应： 1、做生理盐水对照, 看有无自凝。 2、用志贺氏菌属4种多价血清反应，若有凝集，再用单价
群诊断血清（福氏志贺菌多价诊断血清、宋内氏志贺菌 单价诊断血清）行凝集反应定群。 • 血清学试验结果判断： 血清凝集试验阳性：出现肉眼可见凝集颗粒 血清凝集试验阴性：液体呈乳状悬液
实验六
粪便标本的微生物学检验
• 实验目的： • 掌握粪便标本的采集与处理、常见病原菌
及一般微生物学检验程序。 • 掌握沙门氏菌和志贺氏菌的鉴定方法；熟
悉它们的生物学性状。
• 粪便标本的采集与处理：
• 自然排便采集法：自然排便后，挑取粪便2～3克于无菌的容器内送检。硒酸盐增菌液： • 本培养基中的0．4%亚硒酸钠可抑制革兰氏阳
性菌的生长，对革兰氏阴性菌也有毒性，但磷 酸钠有中和此毒性的作用，能使肠道致病菌迅 速繁殖。磷酸氢二钠与磷酸二氢钠有缓冲作用， 有利于肠道致病菌生长。
• SS平板：是专用志贺菌、沙门菌分离培养用的一种强选 择性培养基。
• 胆盐能抑制革兰氏阳性菌生长，煌绿抑制大肠杆菌的生长。促进 志贺菌、沙门菌生长（对胆盐和煌绿等染料有抵抗力）。
KIA、MIU及其他生化反应、 血清学凝集、药敏试验
报告结果
增菌培养（ GN增菌、 亚硒 酸盐增菌液、碱性蛋白胨水）
注：①GN增菌液、亚硒酸盐增菌液用于志贺菌、沙 门菌的增菌。
②直接涂片只适应于疑为霍乱、肠结核及伪膜 炎肠炎患者。
• GN增菌液：本培养基含有胆盐、枸橼酸盐对革兰氏 阳性菌有抑制作用，而对革兰氏阴性菌有增菌作用， 接种标本6小时内，大肠杆菌、变形杆菌及假单胞 菌在此培养基中生长迟缓，而志贺菌、沙门氏菌生 长较迅速。故常于接种粪便6～8小时，再自此增菌 液内接种至SS平板、MaC平板中。
取1#、2#、3#、4#、5#标本细菌分别接种于蔗糖半固 体发酵管、蛋白胨水、尿素、苯丙氨酸斜面、硝酸 盐蛋白胨水，37℃培养18—24小时后，观察结果。
五、血清学试验:
• 沙门菌属：如生化反应符合沙门氏菌属，则可按下述步骤进行血清学 诊断：
1、先用A—F群O多价血清作玻片凝集试验（做生理盐水对照, 看有无自凝） 2、A—F群O多价血清凝集则用O因子血清定群：
• 若疑为霍乱患者，标本应置碱性蛋白胨水中。 • 若疑有耶尔森菌或弯曲菌等，标本应置卡～布运送培养基送检。 • 粪便标本如不能立即送检，可将标本放入甘油盐水保存液中或保存于
冰箱内（勿超过2h）
粪便标本中常见的病原微生物
种类
病原菌
革兰阳性菌 革兰阴性菌
真菌
金黄色葡萄球、厌氧链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌、产气荚膜 梭菌、艰难芽胞梭菌、蜡样芽胞杆菌
六、实验结果：
1、KIA 结果：
KIA 标本号
乳糖 / 葡萄糖
• 胆盐、枸橼酸钠及硫代硫酸钠在一定比例时发挥联合抑菌作用。 • 硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌、沙门菌的有害作用并中和煌绿、
中性红的毒性作用。 • 本培养基除抑制肠球菌、革兰氏阳性菌外，还可抑制大部分大肠
艾希氏菌、产气肠杆菌等革兰氏阴性菌，对志贺菌、沙门菌也有 轻度的抑制作用。
• 由于该培养基抑制杂菌的能力强，故可以增加粪便接种 量而获得较高的阳性分离率。
三、KIA结果观察
KIA 菌名
福氏志贺菌 宋内氏志贺菌 甲型副伤寒杆菌 乙型副伤寒杆菌
伤寒杆菌
乳糖 / 葡萄糖
A/K A/K A/K A/K A/K
H2S
— — —/ + + +/—
动力
— — + + +
气体
— — + + —
分别描述1#、2#、3#、4#、5#标本的KIA结果。
四、生化反应： 根据KIA的结果进一步做生化反应。从KIA斜面上挑
O抗原有许多组成成分，有的是一种菌所独有的，有的是几种菌共 有的。将具有相同菌体抗原的沙门氏菌归属于同一组（群）。故O因 子血清只能定群。 3、A—F群O多价血清不凝集，做Vi因子血清凝集。如果凝集，需用生理 盐水制成浓稠菌悬液后隔水煮沸15～30分钟，再做凝集试验。（新分 离的伤寒及丙型副伤寒常带想此抗原。） 4、按照确定的O群分别用H因子血清检查H抗原。
• 志贺菌属：志贺菌四种多价诊断血清、福氏志贺菌多价诊断血清、 宋内氏志贺菌单价诊断血清。
• 沙门菌属：A—F群多价O血清、O因子血清（O2、O4 O9）、H因子血 清（Ha Hb Hd）、Vi血清。
• 实验方法：
一、分离培养 用无菌方法将1#、2#、3#、4#、5#模拟粪
便标本分别划线接种于SS、Mac上，置35℃ 培养18～24小时。