设计性实验：
银杏叶中总黄酮的提取和测定
小组人员：袁国明郎启国赵永仓王蓉
一、目的要求
1、探究不同浓度的乙醇和在不同时间下对黄酮类化合物提取率的影响。

2、掌握从银杏叶中提取总黄酮的操作步骤和测定方法。

3、了解提取银杏叶中黄酮类化合物制备的基本原理和方法。

二、实验原理
根据超声波具有空化、粉碎、搅拌等特殊作用，对银杏叶的细胞有破坏现象，使乙醇溶液能渗透到银杏叶中，以便让总黄酮溶解在乙醇中，在通过分离提纯的方法，来获得总黄酮的含量。

黄酮类是含酚羟基的化合物，能够和铝离子产生黄色络合物，在碱性条件下溶液呈红色。

因此，本实验所采用的方法是在碱性溶液中加铝盐显色的分光光度法。

其具体操作是在所测定的溶液中加入5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH溶液，在500nm波长下，用紫外分光光度法测定所提溶液中总黄酮的含量。

三、试剂和器材
1、试剂
芦丁标准品；5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；30%、40%、50%、60%、70%、80％的乙醇（用95%的酒精31.91ml、42.55ml、53.19ml、68.83ml、74.47ml、85.11ml ）；及蒸馏水等。

2、材料
新鲜的银杏叶
3、器材
容量瓶25ml（×1） 100ml（×6）；吸管0.5ml（×2）1ml（×2），2ml（×1），5ml （×1）粉碎机；超声波清洗机；高速离心机；三角锥形瓶50ml（×6）；滤纸；分光光度
计；烧杯；具塞刻度试管；分析天平；20ml量筒等
四、操作方法
1、银杏叶的处理
把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉，待用。

2、制作标准曲线
准确称取芦丁标准品5mg，用80％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0.2mg ／mL的标准溶液。

移液管精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO2 0.4mL，摇匀，放置5min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5%NaOH 4.0mL，再加蒸馏水至刻度，摇匀，在80℃水浴中保温10min。

以试剂空白作为参比溶液。

用1cm比色皿，在510nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线（标样浓度和吸光度的关系）。

表1-1 标准曲线制作
管号 1 2 3 4 5 6 7 芦丁标准液（mL）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 5％NaNO2（mL）0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 放置时间(min) 5 5 5 5 5 5 5
0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
10%Al(NO3)3
（mL）
放置时间(min) 6 6 6 6 6 6 6 5%NaOH（mL） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 蒸馏水（mL） 5.2 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0
3、探究不同时间对黄酮提取的影响
分别称取6分1g的银杏叶粉末，放在50mL的三角锥形瓶中，并作相应标记，分别加入70%的乙醇溶液各20mL，在超声波清洗机（500W）超声30 min、35 min 、40min、45 min、50min、 55min将溶液用高速离心机离心后除去滤渣，得到粗产品，用量筒量体积做记录，等待备用。

4、探究不同浓度的乙醇对总黄酮提取的影响
分别称取1g的银杏叶粉末6分，放在50 mL的三角锥形瓶中，分别加入30%、40%、50%、60%、70%、80％乙醇溶液各20毫升，并做标记，在超声波清洗机（500W）超声 45min，将溶液用高速离心机离心后除去滤渣，得到粗产品，用量筒量体积做记录，等待备用。

5、总黄酮的测定
分别吸取不同时间和不同浓度下提取的总黄酮粗产品溶液各1.00 mL稀释10倍，再分别各吸取1.00 mL溶液，加入到10 mL的试管中，各加5％亚硝酸钠0.4mL，放置5 min，再分别加入0.4mL10％硝酸铝，摇匀后放置6 min。

分别加5%NaOH 4.0mL摇匀后，用蒸馏水稀释至10mL刻度，在80℃水浴中保温10 min。

以试剂空白作为参比溶液，以调节分光光度计零点，用1cm比色皿,在510nm波长处样品的吸光度。

由标准曲线法计算总黄酮含量和提取率。

6、结果计算：
（1）总黄酮的含量计算
粗产品中总黄酮的含量= 总黄酮的浓度（mg/ mL）×10
原料重量（g）
（2）计算总黄酮的提取率
总黄酮的提取率= 提取液中总黄酮的含量（g）×100%
原料重量（g）
谢谢老师!。