自身免疫性疾 病的筛选试验 ANA检测
（－）
SLE治疗缓解
病情特重（大量IC沉积消耗抗体）
（＋）低滴度 高滴度 常见于RA等其它自身免疫性疾病 可作为诊断SLE的依据
ENA抗帮助诊断SLE
硬皮病 PM/DM 干燥综合症 抗AMA-M2：PBC
确诊试验
抗dsDNA、Sm、rib抗体
抗Scl-70 抗Jo-1抗体 抗SSA和抗SSB 胞浆自身抗体
自身免疫性疾病检测的应用原则
免疫球蛋白、 补体等检测
+
ANA筛选
抗胞浆型抗体鉴定
ENA抗体谱
其它自身抗体
怀疑自身免疫性疾病
怀疑系统性自身免疫疾病
怀疑器官特异性自身免疫疾病
类风湿因子、抗中性粒细 胞胞浆抗体、抗磷脂抗体 及其它自身抗体检测
④ 加入酶标二抗反应
③ 洗去未反应蛋白 ② 加入标本反应
E ENA检测方法 E
自身抗体
非特异 蛋白
① 纯化抗原膜条（膜条试剂盒）
临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括： 抗U1-RNP 抗Sm 抗SSA 抗SSB 抗Scl-70 抗Jo-1 抗rib-P蛋白
抗可提取性核抗原（ ENA ）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodie
SS？
雷诺现象 干燥综合征？ 面肌痉挛，神经痛 睡眠障碍，头痛
1:3200颗粒型
1:1000颗粒型着丝点 型 1:320颗粒型 1:100颗粒型 1:100胞浆型
高效价斑点型常见于MCTD
核膜型（或周边型）
相关抗体：抗dsDNA抗体 与胶原病、PBC、慢性活动性肝炎等相关
核仁型
相关抗体：抗RNA聚合酶-1抗体、抗SCL-70抗体 与硬皮病相关
核点型（DOTS）
抗着丝点型
见于SLE、SS、PBC、风湿病
硬皮病局限型标志抗体
实验室方法的选择流程
95%～99%可排除SLE
抗可提取性核抗原（ENA）抗体
均质型
Hep-2 细胞
肝片
抗dsDNA抗体 抗ssDNA抗体
高效价：SLE
抗组蛋白抗体(histone) 抗核小体抗体(nucleosome)
低效价：RA,慢性肝病，传单，药物诱发的LN
斑点型（或颗粒型）
Hep-2 细胞
肝片
抗U1-nRNP 抗Sm抗体 抗SSB/La抗体
抗SSB抗体：几乎均在女性患者中检出（29:1），可出现在 SS（40%-95%），SLE（10%-20%）和新生儿红斑狼疮（75%）。 抗SSA和抗SSB抗体同时阳性主要出现在SS 抗Scl-70抗体：分布在核浆内，在核仁内浓度非常高，参 与DNA双螺旋的复制和转录。抗Scl-70抗体可见于25%-75%的 系统性硬化症患者 抗Jo-1抗体：多见于多发性肌炎和皮肌炎，阳性率为25%35%，常常与肺间质纤维化/纤维素性肺泡炎相伴发 抗核糖体P蛋白抗体：为SLE特异性自身抗体（10%-30%）。 SLE中高滴度的核糖体P蛋白与疾病活动度不相关
抗RNP抗体：高滴度抗RNP抗体是MCTD的特征性抗体，抗体 滴度与疾病的活动性相关
抗可提取性核抗原（ENA）抗体
抗Sm抗体：对SLE高度特异（超过90%），约5%-40%患者为 阳性，同ds-DNA抗体一起，都被认为是参与疾病的致病过程
Sm和RNP是同一分子复合物中的不同抗原位点，两种抗原具有相关性， 故抗Sm抗体抗体阳性常伴有抗RNP阳性
抗SSA抗体：最常见于SS（40%-95%的阳性率），也可见于 SLE（20%-60%）及PBC（20%）。抗SSA抗体特别见于新生儿红 斑狼疮（100%），又称新生儿SLE综合征
抗可提取性核抗原（ ENA ）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodie
• 抗核抗体ANA • 核抗原有三个组成部分：组蛋白、 DNA、可溶性核抗原 • 可溶性核抗原可用盐水或磷酸盐缓 冲液从细胞核中被提取
ENA检测方法
• • • • •
免疫印迹法（Western-blot） 斑点酶免疫吸附试验 ELISA 双向免疫扩散（ID） 对流免疫电泳（CIE）
免疫印迹法检测ENA谱的原理 ⑥ 加底物显色，观察结果 ⑤ 洗去多余酶标二抗
HEp-2细胞为底物 的间接免疫荧光 法检测ANA谱
针对特异器官自身抗体检测
阳性
阴性
抗Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、 Jo-1、rib-P、dsDNA、ssDNA、组蛋 白抗体确诊实验检测
抗体阳性确诊或辅助诊断
阴性可排除诊断或需进一步观察
思考
实验操作无误，保证带未出现，可能的原因？
条带RNP/Sm与Sm的关系? 阳性质控的意义?
标本信息
标本号 临床诊断 1 2 体检 口干，腿痛 ANA结果 — 1:1000胞浆型 ENA结果 — —
SSA(60KD)+++SSA(52KD)+ ++
SSA(60KD)++SSA(52KD)++ SCL-70+ SSA(60KD)+SSA(52KD)++ SSB+ Rib-P+ RNP+
3
4 5 6 7
抗ENA抗体谱 (extractable nuclear antigen, ENA)
• ENA是可提取核抗原的总称
• 属非组蛋白的核蛋白，为酸性蛋白 抗原，是由许多小分子RNA与各自对 应的特定蛋白质组成的核糖核蛋白 颗粒，分子中不含DNA
抗ENA抗体谱 (extractable nuclear antigen, ENA)