一，蛋白质电泳相关试剂及缓冲液（一）30％（W/V）丙烯酰胺溶液﹡组分浓度30％（W/V）Acrylamide﹡配制量100ml﹡配制方法1．称取下列试剂，置于250ml烧杯中。

Acrylamide 29gBIS 1g2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。

3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。

配制时应戴手套操作）（二）40％（W/V）丙烯酰胺溶液﹡组分浓度40％（W/V）Acrylamide﹡配制量100ml﹡配制方法1．称取下列试剂，置于200ml烧杯中Acrylamide 38gBIS 2g2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。

3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。

配制时应戴手套操作）（三）10％（W/V）过硫酸铵﹡组分浓度10％（W/V）过硫酸铵﹡配制量10ml﹡配制方法1．称取1g过硫酸铵。

2．加入10ml的去离子水后搅拌溶解，贮存于4℃。

（注意：10％过硫酸铵溶液在4℃保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）（四）5X Tris－Glycine Buffer﹡组分浓度0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（W/V）SDS﹡配制量1L﹡配制方法1．称取下列试剂，置于1L的烧杯中Tris 15.1gGlycine 94g SDS 5.0g2．加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。

3．加入去离子水定容至1L后，室温保存。

（五）2X SDS－PAGE Loading Buffer﹡组分浓度100mM Tris－HCl （pH 6.8）4％（W/V）SDS0.2％（W/V）溴酚蓝20％（V/V）甘油2％（W/V）β－巯基乙醇﹡配制量5ml﹡配制方法1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中1M Tris－HCl （pH 6.8）0.5mlSDS 0.2g溴酚蓝10mg甘油1ml2．加入去离子水溶解定容至5ml。

3．小份分装，0.5ml一管，室温保存。

4．使用前将25μl的β－巯基乙醇加入混匀。

（六）5X SDS－PAGE Loading Buffer﹡组分浓度250mM Tris－HCl （pH 6.8）10％（W/V）SDS0.5％（W/V）溴酚蓝50％（V/V）甘油5％（W/V）β－巯基乙醇﹡配制量5ml﹡配制方法1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中1M Tris－HCl （pH 6.8） 1.25mlSDS 0.5g溴酚蓝25mg甘油 2.5ml2．加入去离子水溶解定容至5ml。

3．小份分装，0.5ml一管，室温保存。

4．使用前将25μl的β－巯基乙醇加入混匀。

二，核酸电泳相关试剂及缓冲液（一）50X TAE Buffer （pH8.5）﹡组分浓度2M Tris－醋酸，100mM EDTA﹡配制量 1L﹡配制方法 1．称取下列试剂，置于1L 烧杯中 Tris 242.2g Na 2EDTA ·2H 2O 37.2g2．加入约800ml 的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml 的醋酸，充分搅匀3．加去离子水将溶液定容至1L 后，室温保存。

（二）10X TBE Buffer （pH8.3）﹡组分浓度 890mM Tris －醋酸，20mM EDTA ﹡配制量 1L﹡配制方法 1．称取下列试剂，置于1L 烧杯中 Tris 108g Na 2EDTA ·2H 2O 7.44g硼酸 55g 2．加入约800ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

3．加去离子水将溶液定容至1L 后，室温保存。

（三）10X MOPS Buffer﹡组分浓度 200mM MOPS ，20mM NaAc ，10mM EDTA ﹡配制量 1L ﹡配制方法1．称取41.8g MOPS ，置于1L 烧杯中，加入约800mlDEPC 处理水，搅拌溶解。

2．用1M NaOH 调节pH 至7.0。

3．再加入一下试剂1M NaAc （DEPC 处理） 20ml 0.5M EDTA （pH8.0）（DEPC 处理） 20ml 4．用DEPC 处理水将溶液定容至1L 。

5．用0.45μm 滤膜过滤除杂，室温避光保存。

（注意：溶液见光或高温灭菌后会变黄，仍可以使用，但变黑则不能使用）（四）溴化乙锭（10mg/ml ）﹡组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭 ﹡配制量 100ml ﹡配制方法1．称取1.0g 溴化乙锭，加入到200ml 容器中。

2．加入去离子水100ml ，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。

3．将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。

4．溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml 。

（五）6X DNA Loading Buffer （单染料）﹡组分浓度0.25％（W/M ） 溴酚蓝 30％（W/M ） 甘油 ﹡配制量 10ml ﹡配制方法1．称取下列试剂，置于15ml 塑料离心管中溴酚兰 25mg2．向离心管中6ml 去离子水，充分搅拌溶解。

3．加入3ml 甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml ，室温保存。

（六） 6X DNA Loading Buffer （双染料）﹡组分浓度0.25％（m/M ） 溴酚蓝0.25％（m/M ） 二甲苯腈蓝FF 30％（m/M ） 甘油 ﹡配制量 10ml ﹡配制方法1．称取下列试剂，置于15ml 塑料离心管中溴酚兰 25mg 二甲苯腈蓝FF 25mg2．向离心管中6ml 去离子水，充分搅拌溶解。

3．加入3ml 甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml ，室温保存。

（七）10X RNA Loading Buffer （单染料）﹡组分浓度10mM EDTA0.25％（m/M ） 溴酚蓝 50％（m/M ） 甘油﹡配制量 10ml ﹡配制方法1．称取下列试剂，置于15ml 塑料离心管中 0.5M EDTA （pH 8.0） 200μl 溴酚兰 25mg2．向离心管中4mlDEPC 处理水，充分搅拌溶解。

3．加入5ml 甘油混匀，用DEPC 处理水定容至10ml ，室温保存。

（八）10X RNA Loading Buffer （单染料）﹡组分浓度 10mM EDTA0.25％（W/V ） 溴酚蓝0.25％（W/V）二甲苯腈蓝FF50％（V/V）甘油﹡配制量 10ml﹡配制方法1．称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200μl溴酚兰 25mg二甲苯腈蓝FF 25mg2．向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。

3．加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。

三，分子生物学常用试剂（一），氨苄青霉素﹡组分浓度100mg/ml 氨苄青霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法1．称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（二），卡那霉素﹡组分浓度50mg/ml卡那霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法1．称取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（三）RNase A﹡组分浓度10mg/ml RNase A﹡配制量 50ml﹡配制方法1．取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．100℃煮沸15min,缓慢冷却至室温，小份分装（1ml 一管）后，置于－20℃保存。

（四）IPTG﹡组分浓度24mg/ml IPTG﹡配制量 50ml ﹡配制方法1．称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

3．用0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（五）X-Gal﹡组分浓度20mg/ml X-Gal﹡配制量 50ml﹡配制方法1．称取1g X-Gal置于50ml塑料离心管中。

2．加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解之后定容至50ml。

3．小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（六）DTT﹡组分浓度1M DTT﹡配制量 10ml﹡配制方法1．称取1.54g DTT置于15ml塑料离心管中。

2．加入8ml的10mM NaAc（pH5.2），充分混合溶解之后定容至10ml。

3．用0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于－20℃保存。

（七）EDTA溶液﹡组分浓度0.5M EDTA﹡配制量 1L﹡配制方法1．称取186.1g Na2EDTA·2H2O置于1L烧杯中。

2．加入800ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。

3．用NaOH调节调节pH值至8.0（约20gNaOH），当pH接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。

4．小份分装后，高温高压灭菌，室温保存。

四，于定量PCR检测的SY BR®Green I 核酸染料采用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBR®Green I最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBR®Green I复合物的量子产额约为0.8。

由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。

SYBR®Green I的最低检出限：20pg DNA（254nm）；60pg DNA（300nm 紫外透射）；此外，SYBR®Green I还可以用于检测寡核苷酸（1-2ng，300nm紫外透射），比EB灵敏20至100倍。

SYBR®Green I用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色。

SYBR®Green I用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。

此外，SYBR®Green I与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。

SYBR®Green I主要用于溶液中DNA的定量，特别适用于荧光定量PCR检测（即实时PCR）。

SYBR®Green I原液是无水DMSO配制10,000倍浓缩液。

配制工作液时需用TAE、TE或TBE缓冲液。

SYBR®Green I应避光存放，原液保存于—20℃；工作液保存于4℃，最好存于密封聚丙烯容器。