微生物模块一、微生物的实验室：1.培养基(1)概念：人们按照微生物对的不同需求,配制出供其的营养基质。

(2)营养组成：一般都含有和。

此外，还需要满足微生物生长对、氧气以及的要求。

（3）分类培养基(含凝固剂); 培养基(不含凝固剂)（凝固剂是 : 中提取到物质，在下凝固，下熔化）2.无菌技术获得纯净培养物的关键：3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤：计算→称量→→→→问题：①.培养基灭菌后，需要冷却到左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？②.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？③.为什么将平板倒置？(2)纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到的肉眼可见的，即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤：，接种时要在旁，原因是。

③常用的微生物接种方法有两种a. 法：是通过在琼脂固体培养基表面的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b. 法：是将菌液进行一系列的，然后将的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

问题：①在这两种接种方法中，计数时只能选哪种接种方法？②两种接种方法的目的是：问题①.划线时为什么要从上一次划线的末端开始？②.划线时不能划破培养基，如果划破了会怎样？③.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？④.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？(3)菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以采用的方法，接种在试管的培养基上，将试管放入保藏②对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。

4.实验室中筛选微生物的原理是。

二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.实验原理：(1)能合成的细菌才能分解尿素(2)配制以为唯一的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌，还要涂布一个牛肉膏蛋白胨培养基，以此说明。

⑶可以用加了的培养基进行鉴别，培养基变2.实验流程：土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→→涂布平板与培养→菌落计数3.统计菌落数目的方法方法一：（活菌计数法）；至少要涂布个平板，最后求取值，还要设置一个平板作为对照，以说明一般选择菌落数在的平板进行计数。

统计菌落数往往比活菌的实际数目，原因是方法二：；用了哪种载玻片问题：①观察酵母菌的数量的动态变化用法，其中也用到了板，因此也叫法②如分别取0.1mL已稀释102倍的水样分别涂布到六个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为26、161、155、158、170，302则每升原水样中大肠杆菌数为______ _ ，三、.分解纤维素的微生物的分离(1)①组成：纤维素酶是一种 ，一般认为它至少包括三种组分，即。

②作用： 纤维素 纤维二糖 葡萄糖(2)纤维素分解菌的筛选①原理： 纤维素分解菌 ↓⎭⎪⎬⎪⎫刚果红纤维素→ ――→纤维素酶红色消失，出现 ②筛选方法： 染色法，即通过是否产生 来筛选纤维素分解菌。

③培养基：以 为唯一 的 培养基。

④实验流程：土壤取样：富含 的环境选择培养：用选择培养基培养，作用是 梯度稀释：用 制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到 纤维素分解菌的培养基上 挑选产生 的菌落问题: 1.土壤中分解尿素的细菌的分离与分解纤维素的微生物的分离的实验流程有哪些异同？2.选择培养为什么能够“浓缩”菌种？3.选择培养中用 培养基作对照，而菌落计数时用 的空白培养基作对照，用途有什么不同？点拨 (1)两种对照组作用比较①判断培养基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培养基同时进行培养。

②判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。

(2)平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同 ①第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。

②每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。

③划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

答案一、微生物的实验室：1.培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。

(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

①自养微生物能够利用空气中的CO2合成有机物，培养基中不需加入有机碳源(可加入无机碳源)。

②固氮微生物能够固定空气中的N2，合成氨态氮，培养基中不需添加氮源。

③培养乳酸菌需要添加维生素；培养霉菌需要将PH调至酸性；培养细菌需要将PH调至中性或微碱性；厌氧微生物需要提供无氧环境。

（3）分类固体培养基(含凝固剂); 液体培养基(不含凝固剂)（凝固剂是琼脂 :红藻中提取到多糖物质，在 44℃下凝固，98℃下熔化）2.无菌技术获得纯净培养物的关键：防止外来杂菌的污染3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤：计算→称量→溶化→（调PH）→灭菌→倒平板问题：①.培养基灭菌后，需要冷却到 50 ℃左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸，冷却到刚不烫手为止②.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？杀灭瓶口杂菌③.为什么将平板倒置？使培养基表面的水分更好地挥发；防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(2)纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由单个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种，接种时要在酒精灯火焰旁旁，原因:火焰附近存在着无菌区域。

③常用的微生物接种方法有两种a.平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b. 稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

问题：①在这两种接种方法中，计数时只能选哪种接种方法？稀释涂布平板法②两种接种方法的目的是：得到由单个细菌繁殖而来的菌落问题①.划线时为什么要从上一次划线的末端开始？能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

②.划线时不能划破培养基，如果划破了会怎样？划破了，细菌会沿划破处粘连生长，无法达到分离单个菌落的目的③.为什么在操作的第一步要灼烧接种环？杀死接种环上原有的微生物每次划线之前都要灼烧接种环？杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者④.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免温度太高杀死菌种(3)菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保的方法，接种在试管的固体斜面培养基上，将试管放入 4 ℃冰箱保藏②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

4.实验室中筛选微生物的原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等养、温度、pH等）,同时抑制或阻止其他微生物生长。

二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.实验原理：(1)能合成脲酶的细菌才能分解尿素；脲酶能催化尿素分解成氨。

(2)配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌，还要涂布一个牛肉膏蛋白胨培养基，以此说明选择培养基具有筛选作用。

⑶可以用加了酚红指示剂的培养基进行鉴别，氨使PH升高后，培养基变红2.实验流程：土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→梯度稀释→涂布平板与培养→菌落计数3.统计菌落数目的方法方法一：稀释涂布平板法（活菌计数法）；至少要涂布3个平板，最后求取平均值值，还要设置一个未接种的培养基作为对照，以说明这些培养基未被杂菌污染一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。

统计菌落数往往比活菌的实际数目 低，原因是 当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

方法二： 显微镜直接计数法 ；用了哪种载玻片 血细胞计数板问题：①观察酵母菌的数量的动态变化用 抽样检测 法，其中也用到了血细胞计数板，因此也叫 血细胞计数板计数法②如分别取0.1mL 已稀释102倍的水样分别涂布到六个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为26、161、155、158、170，302则每升原水样中大肠杆菌数为______ _1.61*108三、.分解纤维素的微生物的分离(1)①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C 1酶、C x 酶、葡萄糖苷酶。

②作用：纤维素C 1酶C x 酶纤维二糖――→葡萄糖苷酶葡萄糖(2)纤维素分解菌的筛选①原理： 纤维素分解菌 ↓⎭⎪⎬⎪⎫刚果红纤维素→ 红色复合物 ――→纤维素酶红色消失，出现 透明圈 ②筛选方法：刚果红（CR ）染色法，即通过 透明圈大小来筛选纤维素分解菌。

③培养基：以 纤维素 为唯一 碳源 的 选择 培养基。

加入刚果红后是鉴别培养基 ④实验流程：土壤取样：富含 纤维素 的环境选择培养：用选择培养基培养，作用是 有利于纤维素分解菌的繁殖，抑制其他细菌的繁殖，可以提高纤维素分解菌的浓度 梯度稀释：用 无菌水制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到 鉴别 纤维素分解菌的培养基上 挑选产生 透明圈 的菌落问题: 1.土壤中分解尿素的细菌的分离与分解纤维素的微生物的分离的实验流程有哪些异同？分解纤维素的微生物的分离的实验多了选择培养这一步。

2.选择培养为什么能够“浓缩”菌种？ 选择培养基 有利于目的菌株的繁殖，抑制其他杂菌的繁殖，可以提高目的菌株的浓度3.选择培养中用 牛肉膏蛋白胨 培养基作对照，而菌落计数时用 未接种 的空白培养基作对照，用途有什么不同？ 未接种 的空白培养基作对照 是为了说明培养基未被有杂菌污染” ；牛肉膏蛋白胨 培养基作对照是为了说明选择培养基具有选择作用 点拨 (1)两种对照组作用比较①判断培养基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培养基同时进行培养。

②判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。

(2)平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同①第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。

②每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。

③划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。