19
CAMP (Staphylococcus aureus)
Listeria monocytogenes
Staphylococcus aureus
20
鉴定
API鉴定试验 可代替硝酸盐还原、MR-VP、三糖铁、糖发 酵、尿素酶和CAMP等试验。
21
鉴定
血清学检验 菌悬液于80℃水域中加热1h，离心弃上清， 剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清 学玻片凝集试验。
菌落形态：24h后菌落呈现黑色，直径为1mm， 在其周围形成一个黑色环。培养48h，菌落仍 成黑色，直径2mm～3mm，除在菌落周围有一 环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。
挑取5个或更多的可疑菌落，接种于TSA-YE。
6
鉴定
蓝色菌落检验 用45°斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈现 蓝灰色到蓝色。 （设标准菌株对照）
23
报告结果
协同溶血试验、血清学试验可根据需要进 行，常规检验可不进行这些试验。
落动氢染验验试还试
酶色
验原验
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋/ ＋
三糖铁 试验
产酸， 不产H2S
糖发酵利用
葡麦七甘鼠木 萄芽叶露李糖 糖糖苷醇糖
＋＋＋－＋－
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ 不产H2S
＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － V － ＋ 不产H2S
L. monocytogenes L. ivanovii
英诺克李斯特氏菌 L. innocua
威尔斯李斯特氏菌 L. welshimeri
西尔李斯特氏菌 L. seeligeri
格氏李斯特氏菌 L. grayi
蓝 典 过 革 溶 动 尿 硝 MR
色型氧兰血力素酸∣
菌 运 化 氏 试 试 酶 盐 VP
＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － V ＋ ＋ 不产H2S
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ 不产H2S
＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋ 不产H2S
18
鉴定
协同溶血试验 （cAMP）
在羊血琼脂平板琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核
细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性
对照菌（英诺克李斯特氏菌），30℃培养24h～ 48h。
单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环
西尔李斯特氏菌
窄小的β溶血环
绵羊李斯特氏菌
大的β溶血环
其他
不溶血
11
鉴定
动力试验 穿刺SIM半固体培养基，于室温（20℃～25℃）
威尔斯李斯 特氏菌
－ －
－
－ ＋
d ND ＋ ND ND －
2
样品的存放与制备
冷冻样品：应于2℃～5℃解冻，且不超过18小 时；若不能及时检验，应置于－15℃保存。
非冷冻的易腐样品：尽可能及时检验，若不能 及时检验，应置于4℃冰箱保存，在24h之内检 验。
无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋 中加225mL FB1增菌液中，充分均质。
进出口食品中单核细胞增生 李斯特氏菌检测方法 SN/T 0184.1-2005
1
李斯特氏菌
特征
格氏李斯 英诺克李斯 特氏菌 特氏菌
β -溶血
－
－
CAMP
－
－
(Staphylococcus
aureus)
CAMP
－
－
(Rhodococcus
equi)
甘露醇
＋
－
α甲基-D－甘 ND
＋
露糖苷
L-鼠李糖
－
d
可溶性淀粉
＋
－
D-木糖
－
－
马尿酸盐水解 －
＋
硝酸盐还原
－
－
小鼠致病力
－
－
绵羊李斯特 氏菌
＋ －
＋
－ － － － ＋ ＋ － ＋
单核细胞增 生李斯特氏 菌 ＋ ＋
－
－ ＋
＋ － － ＋ － ＋
默氏李斯特 氏菌
－ －
－
＋ ND
d ＋ － － ＋ －
西尔李斯特 氏菌
＋ ＋
－
－ － － ND ＋ ND ND －
7
鉴定
典型运动镜检 李斯特氏菌为短棒状 杆菌，可见轻微的旋 转翻滚。 （设标准菌株对照）
注：压片法或悬滴法 暗光
8
鉴定
革兰氏染色 短杆状革兰氏阳性反应
注：陈旧培养物多转为阴性。
9
鉴定
过氧化氢酶试验 挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片
上，滴加1滴3％的过氧化氢溶液，李斯特氏 菌呈过氧化氢酶阳性反应。
培养48h。 李斯特氏菌有动力，呈典型的伞状生长。
12
鉴定
硝酸盐还原试验 接种于硝酸盐肉汤，于35℃培养5d。 李斯特氏菌为阴性。
13
鉴定
MR－VP试验 接种于MR－VP肉汤中，于35℃培养48h。 李斯特氏菌为阳性反应。
14
鉴定
三糖铁试验 接种于TSI，35℃培养5d。 李斯特氏菌斜面和底层产酸，不产硫化氢。
3
增菌培养
225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h，吸取 1mL，加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二 次增菌25h±1h。
4
VIDAS快速筛选（可选）
FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。
5
分离培养
取增菌液一环，划线分离于选择性培养基 OXA、PALCAM上，35℃±1℃培养24h～48h。
单核细胞增生李斯特氏菌：1/2A，1/2B， 1/2C，3A，3B，3C，4A，4AB，4B，4C， 4D，4E，7
22
质量控制
每次检验均需用标准阳性菌株和阴性菌株 进行质量控制。 样品制备的同时，在空白对照FB1增菌液中 加入新鲜配制的每毫升含有10个～100个单 核细胞增生李斯特氏菌的稀释液1mL和阴性 培养物，按检验程序进行同步检验。
15
鉴定
尿素酶试验 穿刺尿素琼脂斜面，于35℃培养5d。 李斯特氏菌尿素酶试验阴性。
16
鉴定
糖发酵试验 接种0.5%葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、 鼠李糖、木糖发酵管内，35℃培养24h～48h， 阴性继续培养到第5天。
17
李斯特氏菌菌种鉴别特征
中文菌名
学名
单核细胞增生 李斯特氏菌
绵羊李斯特氏菌
划一直线，使两线平行，
在平行线上分别接种金黄 色葡萄球菌ATCC49444和 马红球菌ATCC6939，在两 线之间垂直接种，与两线 相近但不相交，于35℃培 养24h～48h后，观察相交 处溶血情况。
窄的β溶血带
L. monocytogenes
不溶血 宽的β溶血带
L. innocua
L. ivanovii