5.培养基和试剂
5.1常规原则
对于目前实验室操作，见ISO7218
注意2：因为培养基和试剂的数量较多，其经过了更可取的考虑。出于文章简洁的目的，在附录B中给出其组分和制备。
5.2 初级选择性富集培养基含降低浓度选择性试剂的Fraser培养液（半Fraser培养液）
见条款B.1
5.3含全浓度选择性试剂的选择性次级富集培养液（Fraser培养液）
见条款B.2
5.4选择性固体接种培养基
5.4.1第一个培养基：Oxford琼脂
见条款B.3
5.4.2第二个培养基：PALCAM琼脂
见条款B.4
5.5固体培养基：胰蛋白胨大豆酵母提取物琼脂（TSYEA）
见条款B.5
5.6液体培养基：胰蛋白胨大豆酵母提取物增菌液（TSYEB）
见条款B.6
5.7绵羊血琼脂
4.1应用含降低浓度选择性试剂的选择性富集培养液（半Fraser培养液）进行初级富集
对选择性初级富集培养液（包含1体积氯化锂和半体积吖啶黄以及萘啶酸—半Fraser培养液，也用作检验过程的稀释液）恒温培养，30℃24h；
4.2应用含全浓度选择性试剂的选择性富集培养液（Fraser培养液）进行次级富集
3.2单核增生李斯特氏菌的检验依据本部分ISO11290实施检验，在给定产品的质量和体积的条件下，检验这些微生物的存在或不存在。
4.原理
在本部分ISO11290范围内，单核增生李斯特氏菌检验需要四个连续的阶段（见附录A检验流程图）
注意1：李斯特氏菌可能存在量少并与大量的其它种类细菌混杂，因此需要选择性富集。同时也必须检测受破坏的李斯特氏菌，初级选择性富集培养基，含有降低的抑制剂浓度，可以至少部分达到此目的。
8. 检样制备
制备检样应根据相关产品适当的特定取样国际标准，如果没有特定国际标准，推荐有关各方就此应达成协议。
9．检验步骤
9.1检样份和初始悬浮液
见ISO6887以及所有产品相关的特定国际标准1。
制备初始悬浮液，用5.2中详细说明的选择性初级富集培养基作为稀释液。
通常情况下，制备初始悬浮液是将x g/ml所取检样加入到9x g选择性初级富集培养基（5.2）中，使二者比例1/10（质量：体积或体积：体积）。
国际标准ISO11290-1
第一版1996-12-15
食品和动物饲料微生物学---单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法
第一部分
检测方法
内容页次
1范围1
2参考标准1
3定义1
4原理2
5培养基和试剂2
6设备和玻璃仪器3
7取样3
8取样前处理3
9步骤3
10结果表述7
11检验报告7
附录
A检验步骤图8
B培养基和试剂的组成和配制9
常用微生物试验设备（见ISO7218）以及，尤其是下列：
6.1 干热灭菌设备（烤箱）或湿热灭菌设备（灭菌锅）
见ISO7218
6.2 干燥箱或培养箱，能够维持恒温于25℃±1℃以及50℃±1℃；
6.3 数个培养箱，能够使所培养的培养基、平板以及试管恒温于下列范围：
a) 25℃±1℃
b) 30℃±1℃
c) 35℃±1℃或37℃±1℃
从4.1得到的培养物用高选择性次级富集培养液培养，35℃或37℃48h；
4.3从从4.1及4.2得到的培养物接种到两种选择性平板上
a）Oxford琼脂
b）PALCAM琼脂
保温于30℃、35℃或37℃24h后检查，如有必要，可保温48h后检查可疑的单核增生李斯特氏菌特征性菌落的存在。
4.4确认
再次培养可疑的单核增生李斯特氏菌特征性菌落，如4.3所述接种培养并用适当的形态、生理生化方法检测确认。
ISO6887：1983，微生物学---微生物检验中稀释液制备的一般导则
ISO7281：1996，食品及动物饲料微生物学-O11290适用以下定义：
3.1单核增生李斯特氏菌依据本部分ISO11290实施检验，在固体选择性培养基上形成典型菌落并呈现固有形态、生理生化特征的微生物。
1范围
本ISO11290详细说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法。
限于简介中讨论的条件，本ISO11290适用于给人消费和作为动物饲料的产品。
2参考标准
以下标准包含的条件；通过参照这些内容，组成了这部分ISO11290的条件。出版时，引用的这些版本是有效的。所有标准都需要修订，而各机构对本部分基于ISO11290的批准应鼓励调查和应用以下引用标准的最近版本。IEC和ISO成员保留目前有效的国际标准的注册。
见条款B.7
5.8糖发酵增菌液（鼠李糖和木糖）
见条款B.8
5.9动力试验琼脂（可选做）
见条款B.9
5.10 CAMP（Christle，Atkins，Munch-Petersen）协同凝集试验及试验菌株
见条款B.10
5.11过氧化氢溶液
见条款B.11
5.12磷酸盐缓冲液（PBS）
见条款B.12
6．设备和玻璃仪器
6.13 Henry 证明试验设备（选用0
见附录C
6.14 显微镜，最好是相差显微镜，载玻片和盖玻片。
7.取样
重要的是实验室收到的样品必须真正具有代表性，并且样品在运输和储存过程中未受损坏和改变。
取样方法在本部分ISO11290中不会详细介绍，如果没有针对产品的特定取样标准，推荐有关各方就此应达成协议。
C亨氏证明试验16
食品和动物饲料微生物—单核增生李斯特氏菌检测和计数的水平方法
第一部分
检测方法
警告：为了保障实验室人员的安全，强烈推荐执行单核增生李斯特氏菌检验应在具备相应设备条件的实验室进行，在有经验的微生物专家控制下，保温后的一切丢弃物应小心处理。特别是，强烈推荐孕妇不能操作单核增生李斯特氏菌的培养。
6.4 水浴锅，能维持恒温于47℃±2℃
6.5 接种环 铂/铱或镍/铬制成，直径大约3mm，以及同样材料制成的金属丝，或曲棍球杆形状的玻璃L-棒或单用接种环。
6.6 pH计，能读数接近0.01pH单位（25℃），保证测量准确至±0.1pH单位。
6.7试管或烧瓶，适宜容量，用以对培养基进行灭菌和储存和温育液体培养基。
6.8 量筒，容量50ml至1000ml，用以制备稀释液和培养基。
6.9 全打出刻度吸管，标注容量10ml和1ml，刻度分别是0.5ml和0.1ml分度。
6.10 培养皿 直径90至100mm。
6.11适宜于微需氧培养的罐（选用）
6.12混合气体 （选用） 特用于微需氧培养。
5%-12% CO2，5%-15% O2，75% N2