天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白（DNP）形 式存在于细胞核中。环绕着8个组蛋白构成核小体
从细胞中提取DNA 时，要先把DNP抽提出来，再把P除去， 再除去细胞中的糖，RNA及无机离子等，从中分离DNA 。
DNA提取的几种方法
（1）水抽提法
利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低 盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分 溶解于水中，离心后收集上清液。在上清中加入固体 氯化钠调节至2.6M。加入2倍体积95%乙醇，立即用 搅拌法搅出。然后分别用66%、80%和95%乙醇以及 丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品。此法 提取的DNA中蛋白质含量较高，故一般不用。为除蛋 白可将此法加以改良，在提取过程中加入SDS。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。
三、主要仪器及试材
实验器材：高速冷冻离心机，高压灭菌锅，离 心管，枪头，移液器，恒温水浴摇 床，冰箱等
试剂及作用
SDS（十二烷基硫酸钠）：溶解细胞膜上的脂类与 蛋白质，使细胞膜裂解，并解离细胞中的核蛋白， 使与DNA双链紧密结合的组蛋白分开和变性，破 坏蛋白质的二级和三级结构，使其容易被蛋白酶水 解。另外，还能与蛋白质结合而沉淀。
六、实验结果处理
提交“哺乳动物白细胞DNA分离”实验报 告（统一格式、纸张）
七、思考题
哺乳动物白细胞DNA分离的原理 及各种试剂的作用。
30μl左右至终浓度100μg/ml，10％SDS
150μl至终浓度0.5%，55℃水浴消化过夜
加入等体积的Tris.Cl饱和酚，轻轻 摇匀10-20min，10000g离心10min
转移上层水相至另一离心管中（重复此步骤一次）
加入等体积苯酚/ 氯仿/ 异戊醇（25: 24: 1），轻轻摇动10-20min以混匀
10000g离心10min，吸取上层水相于另一离心管
加入等体积的氯仿/ 异戊醇（24: 1） 轻轻摇动10min以混匀，10000g离心 10min，吸取上层水相于另一离心管
加入两倍体积冰预冷无水乙醇，轻 轻转动离心管，DNA呈絮状析出
10000g离心5min沉淀DNA或用玻棒或去头吸 管小心挑出DNA沉淀，放入1.5ml离心管中
苯酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用。用 苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分 子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶 于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重 复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性 质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可 用玻璃棒漫漫绕成一团，取出。
实验二 哺乳动物白细胞 DNA分离
华中农业大学动物科技学院
一、实验目的
掌握利用苯酚抽提法提取DNA的技术； 明确影响提取畜禽血液DNA质量的因素。
二、实验原理
核酸的理化性质
（1）DNA是极性化合物，溶于水，不溶于乙 醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游 离酸易溶于水。
（2）在酸性溶液中，DNA易水解，在中性或 弱碱性溶液中较稳定。
EDTA（乙二胺四乙酸）：可以螯合Mg离子，从而 有助于阻止核酸分子间的聚集及核酸与蛋白质间的 聚集，与SDS一样还可抑制核酸酶的活性。
蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA 结合的组蛋白，在SDS存在下活性增强，不受 EDTA的抑制，在较高温度下仍有活性。
苯酚/氯仿：除去变性的蛋白质及多糖、脂类等 杂质，氯仿还可除去水相中残留的酚。
B. 以稀盐酸溶液提取DNA时，加入适量去污剂， 如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取 过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作 用，在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离 子的烙合剂。通常用0.15M NaCl，0.015M柠檬 钠，并称SSC溶液，提取DNA。
（4）苯酚抽提法
（2）阴离子去污剂法
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性， 可以直接从生物材料中提取DNA。由于细胞 中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键 结合，因为阴离子去污剂能够破坏这种价键， 所以常用阴离子去污剂提取DNA。
（3）浓盐法
A. 利用DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者 分离，常用的方法是用1M 氯化纳抽提，得 到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇 荡，使乳化，再离心除去蛋白质，此时蛋白 质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位 于上层水相中，氯仿位于下层，用2倍体积 95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。
异戊醇：防止水相和有机相之间的蛋白质起泡。
酚：市售的酚需要重新蒸馏，在酚中加入0.1%的抗 氧化剂8－羟基喹啉，可减缓酚的氧化，还可使试 剂变成黄色。酚试剂PH值应调到8.0（PH5-6， DNA可以部分地溶解在有机相或界面中，在更酸的 条件下DNA发生脱嘌呤而产生缺口）。
四、实验方法பைடு நூலகம்步骤
白细胞沉淀加入1×SET 1~2ml，蛋白酶K
再用预冷无水乙醇漂洗一次， 10000g离心 5min沉淀DNA，弃乙醇，自然干燥DNA沉淀
加入200μl 去离子水溶解DNA，分装保存
五、实验注意事项
混匀时力度不应过大； 吸取上层水相时，应小心吸取，不应
吸取蛋白质层； 洗涤DNA沉淀时应用预冷的无水乙醇； 实验过程中应防止苯酚、氯仿烧伤。