流式细胞仪---教材
流式细胞仪
1.流式细胞术概述 2.流式细胞仪概述 3.流式细胞仪系统结构 4.流式细胞仪软件介绍 5.流式细胞仪其它
目录
1.流式细胞术概述
1.流式细胞术概述
流式细胞术定义 流式细胞术发展史 流式细胞术特点
1.流式细胞术定义:
1.流式细胞术概述
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM或 FACS):是利用流式细胞仪 对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、 快速定量分析,同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。
2.流式细胞仪概述
2.流式细胞仪的发展史与商品化:
•1953年:Parker 和 Hutcheon 描述一种全血细胞计数器装置,成为流 式细胞仪的雏型; •1969年:Van Dilla Fulwyler 发明第一台荧光检测细胞计; •1970年:Phywe研制脉冲细胞光度计,备有荧光镜的FCM,DNA定 量;同年Kamensky发明白细胞分类流式细胞仪,激光光源,吖啶橙 染色,测定淋巴、单核、中性粒C; •1972年: Len Herzenberg等在斯坦福大学研制荧光激活细胞分选仪 (FACS),氩离子激光,标志着流式细胞仪商品化时代到来; •1973年: Becton Dikinson (BD)公司投入市场,第一台FACS-Ⅰ问世, 其 后 2 0 多 年 来 不 断 改 进 完 善 产 品 , 先 后 推 出 FA C S A n a l y z e r 、 FACScan、FACSCalibur、FACSLSR-Ⅱ、FACSVantage、FACSDiva、 FACSAria等; •1975年: Kochler 和 Milstein 提出单克隆抗体技术,为细胞研究中 大量的特异性免疫试剂的应用奠定基础;鉴于商业仪器的发展;
•1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白; •1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计数粒子的方法的专利; •1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞 •1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理,成功设计红细胞光学 自动计数器
2.流式细胞仪概述
2.流式细胞仪概述
流式细胞仪定义 流式细胞仪的发展史与商品化 流式细胞仪的生产厂家 流式细胞仪的分类 BD公司、Beckman公司的分析仪及分选仪外观
2.流式细胞仪概述
贝克曼库尔特Gallios流式细胞仪
1.流式细胞仪定义:
2.流式细胞仪概述
流式细胞仪(Flow Cytometor, FCM)是以流式细胞术为核心技术,对 高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器,主 要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术,计算机对数据的采 集和分析技术等。
2.流式细胞仪概述
Bec司的流式细胞分选仪:
3.流式细胞仪系统结构
3.流式细胞仪系统结构
流动室与液流系统 激光光源与光学系统 信号检测与分析系统 分选系统
3.流式细胞仪系统结构
•1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测 细胞计
•1972年Herzenberg研制出细胞分选器 •1975年Kohler等提出单克隆抗体技术,为细胞研究提供大量的特异 免疫试剂大量厂家不断生产流式细胞仪
3.流式细胞术特点:
1.流式细胞术概述
•分析对象:单细胞悬液或生物颗粒 •分析速度:快速,最高达上万个细胞/秒 •检测参数:多参数(两个散射光参数、多个荧光参数) •可同时测定多种可溶性细胞成分:流式微球芯片技术(Cytometric Beads Array,CBA) •检测结果:精度高、准确性好 •先进的细胞定量技术
流式细胞术是一项新型的、发展迅速的生物医学分析技术,它是集 激光技术、光电测量技术、计算机技术、流体力学以及细胞免疫荧 光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技细胞分析技术。
2.流式细胞术发展史:
1.流式细胞术概述
•1930年Caspersson和Thorell开始致力于细胞计数的研究; •1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化,用光电仪记录流过一 根毛细管的细胞;
5.流式细胞仪分类:
2.流式细胞仪概述
临床型:光路调节系统固定,自动化程度高,操作简便,易掌握, 适用于临床常规测试;
科研型:分辨率高,选配多种波长和类型激光器,可将感兴趣细胞 分选到特定培养孔或板上,适用于科研。
2.流式细胞仪概述
BD公司的流式细胞分析仪
2.流式细胞仪概述
BD公司的流式细胞分选仪
BD、Beckman Coulter 产品型号种类齐全,占市场份额较大,如: 经济普及型流式细胞仪 :FACSCount、Cytomics FC500 ; 大型科研型流式细胞仪: BD FACSAria、EPICS ; 特点:产品价格昂贵,我国使用的单位基本上是科研机构。
Partec 产品结构紧凑,造价低,便于携带,适合边远地区和发展 中国家,在植物学的研究中占有较大份额。Partec 公司的 CyFlow 于2004 年 1 月进入太空站用于研究工作,成为世界上首台升上太空 的流式细胞仪,证明其结构紧凑,性能优越的特点。
2.流式细胞仪概述
•1983年:Shapiro 认为多参数分析流式细胞仪可以实现。此后,流式 细胞仪进入一个快速发展的时期; •1994年:美国Cytomation公司推出高性能、高速分选装置MoFlo,该 机以出色的性能和创新设计理念,一经推出即受到广泛关注; •2008年:美国BD公司推出Influx,在MoFlo基础上实现了原位、立 体分选。
2.流式细胞仪概述
4.流式细胞仪生产厂家:
目流式细胞仪生产厂家主要有 BD、Beckman Coulter、Partec、 Guava、Union Biometrica、ABI、Amnis 等等。
美国 BD、Beckman Coulter 和德国的 Partec 占领着流式细胞仪市 场的统治地位。