二.利用抗原抗体反应的实验
主要用途： 1. 用已知的抗原检测未知的抗体。 2. 用已知的抗体检测未知的抗原。 3. 定性或定量检测体内各种大分子，如：细胞因子，
免疫球蛋白。
二.利用抗原抗体反应的实验
▪免疫凝集试验 ▪免疫沉淀反应 ▪免疫标记技术 ▪其他
1.免疫凝集试验
颗粒抗原(例；细菌、红细胞）或可溶性抗原结 合于不容性载体微粒上后与相应的抗体在适当的 条件下，经一定时间后凝集成肉眼可见的凝集物。
免疫凝集反应
直接凝集反应 间接凝集反应
直接凝集反应
颗粒抗原(例；细菌、红细胞）与相应的抗体直接结 合所出现的凝集现象称为直接凝集反应。
颗粒抗原
相应抗体 肉眼可见的凝集物 直接凝集
试管法
反应直接凝集Leabharlann 验玻片法间接凝集反应
将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关 的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应的抗 体(或抗原)作用，在有电解质存在的适宜条件下，即 可发生凝集，称为间接凝集反应。 载体：人或动物的红细胞、活性碳颗粒、聚苯乙烯胶 乳等。 载体增大抗原（或抗体）反应面积。
第一节 抗原抗体的检测
一.抗原抗体反应
指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合 反应，是免疫球蛋白分子上的抗原结合位和抗 原分子上的抗原决定簇相互吸引以及多种分子 间的引力参与下发生的反应。抗原抗体反应可 发生于体内，也可发生于体外。
抗原与抗体结合力
抗原与抗体之间通过非
共价键结合，它们之间的 结合力包括电荷引力、范 德华力、氢键结合力和疏 水作用力。多种非共价结 合力使抗原抗体紧密结合 在一起。
第八章 免疫学检测技术
讨论课
免疫学理论（或免疫学技术）在 食品科学中的应用
PPT内容
1、研究背景 2、研究目的 3、实验方法 4、结果与分析 5、结论
第八章 免疫学检测技术
免疫学检测技术以其灵敏度高、专一性 强和速度快等显著特点广泛用于食品的品 质、质量、安全以及食品中生物活性成分的 检测与分析。
酶标记免疫学技术
将酶催化作用的高效性与抗原抗体的特异性相结 合的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体后形成的 酶标记物，既保留抗原或抗体的免疫活性，又保留了 酶的催化活性。当酶标记物与待测标本中相应的抗原 或抗体相互作用时，可形成酶标记抗原抗体复合物。 利用复合物上标记的酶催化底物显色，其颜色的深浅 与待测标本中抗原或抗体的量相关。
抗原 抗体
抗原与抗体反应特点
1、特异性：抗原抗体在化学结 构和空间构型上呈互补关系， 两者结合具有高度特异性。 2、按比性：两者分子比例合适 时才出现最强的反应。 3、可逆性：改变pH和离子强度 是最常用的促解离方法。
抗原 抗体
抗原与抗体反应的影响因素
1）抗原抗体性质：互补程度 2）酸碱度：pH 6-8 3) 温度：37 度 4) 电解质：0.85%氯化钠或各种缓冲液
3.免疫标记技术
免疫标记技术immunolabelling technique 指用荧光素，放射性核素，酶、化学发光剂 等作为追踪物，标记抗体或抗原进行的抗原 抗体反应。具有灵敏度和特异性高，快速， 可定性、定量等检测。
免疫标记技术分类
❖酶标记免疫学分析EIA ❖放射线标记免疫学分析RIA ❖免疫荧光法IF
灵敏度：ng-pg, 常用酶:辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶
酶标记免疫学技术
o酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) o免疫印迹技术(Immuno-blotting) o酶免疫组化技术（enzyme immunohistochemistry technique) o其它
可溶性抗原
不容性载体
相应抗体
正向间接 凝集反应
可溶性抗体
不容性载体
可溶性相 应抗原
待测标本 可溶性抗体
相应抗体
致敏抗原
凝集 不凝集
SPA
相应抗原
反向间 接凝集 反应
间接凝集 抑制反应
协同凝 集反应
免疫凝集试验应用
常用于食品安全检测，如：食物中微生物志贺氏 菌污染检测。 具体方法：SPA（Staphylococcal Protein A, 金黄色葡 萄球菌细胞壁的一种蛋白质成分）具有同人和多种哺 乳动物IgG分子Fc段结合的能力。结合到SPA上的志贺 氏菌抗体与志贺氏菌产生特异性的凝集反应，产生可 见的凝集反应，从而用于快速检测。
酶联免疫吸附试验（ELISA)
ELISA : enzyme linked immunosorbent assay
将已知抗体（抗原）包被于载体上，再加上抗 原-抗体反应使酶标记抗体（抗原）结合在载体上， 经洗涤去除游离的酶标记抗体（抗原）后加入底 物显色，定性或定量分析有色产物确定待测物 的存在与含量的检测技术。
双向免疫扩散
抗原
抗体
双向琼脂扩散（double immunodiffuse test)可溶性 抗原和抗体在含有电解质的同一个琼脂凝胶板的对应 孔中，各自向四周凝胶中扩散，如果两者相对应，则 发生特异性反应，在浓度比例合适处形成肉眼可见的 白色沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性检测、组 成和两种抗原的相关性分析。
酶联免疫吸附试验（ELISA)
间接法 双抗体夹心法 竞争法
免疫电泳
将抗原样品先进行电泳，使其中的各种成分彼此 分开，然后加入抗体做双向免疫扩散，以分离的各 抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例 适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。
免疫沉淀试验应用
常用于食品安全检测，对食品中污染 病源菌的定性和监别，以及食品中的 某些成分。 如：单向免疫扩散法检测牛乳中免疫 球蛋白含量。
2.免疫沉淀反应
免疫沉淀反应（precipitation）是指可溶性抗原 （细菌培养液、细胞或组织浸出液、血清蛋白等） 与相应抗体特异结合后，在电解质参与下出现的沉 淀现象。该反应多用于半固体琼脂作为介质，抗原 抗体在凝胶中扩散，在比例合适处形成白色沉淀。
单向免疫扩散
单向免疫扩散（single immunodiffusion) 将一定量的已知抗体均匀混于琼脂凝胶中 制成琼脂板，在适当位置打孔后加入抗 原。孔内抗原向四周呈环状形成浓度梯 度，在抗原与抗体的量达到一定比例时即 可形成肉眼可见的沉淀环。