呼吸道标本细菌学检验标准操作程序
1.检验目的
规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。

2.适用范围
呼吸道标本培养和涂片检查。

3.标本采集与运送
3.1 采集时间以晨痰为好。

3.2 采集方法
3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。

3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。

3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。

3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。

3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。

首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。

3.3 标本运送
3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。

3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。

3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。

4.检验步骤
4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种
环分区划线接种。

4.2 涂片在接种的同时进行涂片。

用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。

4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。

4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。

先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。

标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。

表1 痰液标本分级
4.5 培养结果观察
4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，
4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。

4.5.3 机会致病菌：肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、肠杆菌属细菌、铜绿假单胞菌、洋葱博克霍尔德菌、星型诺卡菌、衣氏放线菌、卡他莫拉菌等。

机会致病性真菌：球孢子菌（明确的致病性真菌）、曲霉菌、毛霉菌、卡式肺囊虫、酵母样真菌。

4.5.4 结合痰涂片，对于合格的痰，做如下处理：
4.5.4.1 镜下未见明显优势菌的，血平板正常菌群生长、巧克力上无嗜血杆菌生长，可延长培养至48h，或做DNA酶筛选卡他莫拉菌。

如DNA酶阴性，48h培养板无有明确意义病原菌生长，报告“正常菌群生长”。

4.5.4.2 镜下见WBC内有吞噬菌的，分离相应的细菌鉴定药敏。

4.5.4.3 镜下见革兰阳性球菌，矛头状，注意观察血平板有无肺炎链球菌，分纯可疑菌落，并在一区贴OPTORCHIN纸片。

4.5.4.4 镜下可见革兰阴性小杆菌，多形性，巧克力平板可见较多的透明、湿润革兰阴性杆菌，做卫星试验。

血平板卫星+，MH卫星-，报告“流感嗜血杆菌”；血平板卫星+，MH卫星+，报告“副流感嗜血杆菌”。

4.5.4.5 血平板上机会致病菌生长，超过2+，分离相应的细菌鉴定药敏。

4.5.4.6 镜下见较多酵母孢子和假菌丝，血平板有3+的真菌生长，分离真菌显色鉴定，与临床医生联系商量要不要进一步做药敏。

4.5.4.7 镜下可见有隔菌丝和/或曲霉头部结构，血平板有较多曲霉生长，联系临床医生要不要进一步鉴定。

4.6 特别提示
4.6.1 社区获得性肺炎的非典型病原体如肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌常规培养不出，需要特殊培养基。

4.6.2 百日咳鲍特菌生长慢，需鲍金培养基培养，偶可在新鲜配制的巧克力平板生长。

4.6.3 结核分枝杆菌普通培养不能生长，需特殊培养。

4.6.4 痰培养不做厌氧培养。