分布：黄酮类化合物在花、 分布：黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷的形式存在，而在木 果等组织中多以苷的形式存在， 游离苷元形式存在 部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在。 苷 即糖苷的简称） 部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在。(苷，即糖苷的简称） 性质：黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水， 性质：黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于 难溶于酸性水 碱性水，故可用碱性水提取 再将碱水提取液调成酸性， 碱性水提取， 碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可 沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄芩（ 沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄芩（qin)苷提取都应用此 苷提取都应用此 法。
芦丁的提取与定性反应
糖 的 鉴 定
水解所得滤液5ml 水解所得滤液5ml
10ml水 1.5g Ba(OH)2加10ml水 用Ba(OH)2乳调PH值至中性， 乳调PH值至中性， PH值至中性 折叠扇形滤纸过滤白色沉淀
滤液 残渣 蒸干， 蒸干，放冷
加1ml95%乙醇溶 1ml95%乙醇溶 解得样品溶液 解得样品溶液
glu rha
sample rha
sample glu
点样
层析
芦丁中糖的鉴定
1、取一对直径大小相同的培养皿，内置一小层析槽，装上展开剂， 密闭。 2、取一圆形滤纸，以圆心为中心，用铅笔将其分为六等份，分别标 注。将标准品和样品用毛细管在距圆心1cm处分别以弧形点样 [1]，挥干溶剂。 3、另取一小长条滤纸卷成纸卷，从圆滤纸的圆心处穿进去，插入层 析槽的展开剂中上下培养皿密闭。由于毛细作用，展开剂在滤 纸上不断水平扩散，当展开至距原点5-6cm处时取出，红外灯 下烘干，喷显色剂，再烘至显出斑点为止。观察结果并记录Rf 值。 注：[1]为确定点样量，应先做纸斑反应。方法为：取一长条滤纸， 用毛细管分别点不同量的样品溶液，红外灯下烘干，喷显色剂， 再烘至显出斑点为止。确定最佳点样量。
芦丁的提取与定性反应
芦 丁 的 全 乙 酰 化
芦丁 0.1g
加入2ml无水吡啶 加入2ml无水吡啶 2ml 加入8ml 8ml醋酐 加入8ml醋酐 反应液
防水
直火，水浴上回流30min，放冷，搅拌 直火，水浴上回流30min，放冷， 30min 下将反应液倒入70ml水中， 70ml水中 下将反应液倒入70ml水中，一直搅拌 到油滴消失， 到油滴消失，白色沉淀析出为止 反应液 抽滤， 抽滤，干燥 反应物
芦丁的提取与定性反应
一 实验目的和要求
实验目的： 实验目的： 以槐米中提取黄酮类化合物--芦丁，掌握碱--芦丁 以槐米中提取黄酮类化合物--芦丁，掌握碱-酸法提取黄酮类化合物 的原理及操作 通过芦丁结构的检识， 通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法 掌握黄酮类化合物的化学定性鉴定，熔点和薄层分析等方法， 掌握黄酮类化合物的化学定性鉴定，熔点和薄层分析等方法，了解 UV及NMR在苷类结构鉴定中的应用 UV及NMR在苷类结构鉴定中的应用 实验要求 获得三个化合物：芦丁、槲皮素、 获得三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰物 能根据化学实验及UV NMR数据初步推断出芦丁的结构 UV、 数据初步推断出芦丁的结构。 能根据化学实验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类 化合物的结构测定有一般性的了解
芦丁的提取与定性反应
聚 酰 胺 薄 层 色 谱
样品：分别取少量芦丁、槲皮素、 样品：分别取少量芦丁、槲皮素、芦丁的十乙酰 化物用1ml95%乙醇溶解 化物用1ml95%乙醇溶解 1ml95% 展开剂：75%乙醇 展开剂：75%乙醇 10ml 显色剂：氨水， 显色剂：氨水，2%AlCl3 /EtOH
观察记录
颜色 标 准 品 样 品 芦丁 槲皮素 芦丁 槲皮素 芦丁酰化物 氨水熏 日光 UV 日光 UV AlCl3 喷雾 日光 UV R f值
芦丁的提取与定性反应
定 性 反 应
样品：少量芦丁、 样品：少量芦丁、槲皮素
黄Hale Waihona Puke 母核盐酸盐酸-镁粉反应 将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇， 将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴 1ml乙醇 加几滴浓盐酸， 2min内 观察颜色变化。 加几滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。
苷水解 70量加入 按1：70量加入 2%硫酸 硫酸， 2%硫酸，加热 40min， 40min，放冷静 置，抽滤 滤液 滤液（ 滤液（苷） 沉淀 干燥 槲皮素（备用） 槲皮素（备用） 糖鉴定
残渣 冷却 抽滤 精制芦丁（ 60℃烘 精制芦丁（ 60℃烘 备用） 干，备用）
苷水解反应
+鼠李糖+葡萄糖
定 性 反 应
2%二氯氧锆2%二氯氧锆二氯氧锆 柠檬酸反应
3-OH，5-OH ，
将样品溶于1ml乙醇，加入 二氯氧锆 二氯氧锆将样品溶于1ml乙醇，加入2%二氯氧锆-柠檬 1ml乙醇 酸溶液，摇匀，观察颜色变化。 酸溶液，摇匀，观察颜色变化。将反应液均分成 两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液， 两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液，另一部 分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。 分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。
芦丁的提取与定性反应
思考题
苷类结构的检识大体程序如何？ 苷类结构的检识大体程序如何？ 苷类水解的方法？ 苷类水解的方法？ 怎样确定芦丁分子中只含有一分子葡萄糖及一分子鼠李 糖 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素3-OH上？ 上 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素 苷元的结构怎样确定？ 苷元的结构怎样确定？ 怎样确定苷键的构型？ 怎样确定苷键的构型？ 芦丁的全乙酰化的植被过程中为什么要保证无水条件？ 芦丁的全乙酰化的植被过程中为什么要保证无水条件？
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O H2O Zr O Cl O 4'
稳定性： 稳定性： 3-OH络合物〉5-OH络合物 OH络合物〉 OH络合物 络合物
芦丁的提取与定性反应
实验注意事项
芦丁粉碎不可过细， 芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的， 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除 去槐花米中含有的大量多糖类粘液质， 去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但pH值不能过 值不能过 高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出 pH值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最 值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（ 值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解 值为5） 佳pH值为 ） 值为
芦丁的提取与定性反应
黄酮母核
盐酸盐酸-镁粉反应
定 性 反 应
将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇， 将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴 1ml乙醇 加几滴浓盐酸， 2min内 观察颜色变化。 加几滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。
苷类
Molish反应 Molish反应 将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α 将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α-萘 1ml乙醇 10% 酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸， 酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸， 注意观察两界面产生的变化。 注意观察两界面产生的变化。
苷类
Molish反应 Molish反应 将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α 将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α-萘 1ml乙醇 10% 酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸， 酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸， 注意观察两界面产生的变化。 注意观察两界面产生的变化。
芦丁的提取与定性反应
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O
OAc
芦丁的提取与定性反应
4'
O
槲皮素
OH OH
OAc
AcO
HO O
O
O
O
OAc
OH OH O OH OH OH OH OH O CH2O
O CH2O O OAc OAc
OAc
O
O
OAc OAc
OAc
芦丁
芦丁十乙酰化物
实验原理
提取原理---芦丁分子中有酚羟基，呈弱酸性。在碱水 中成盐而增大其溶解度。然后，在酸中不溶而沉淀析 出，从而进行提取。 精制原理---利用芦丁易溶于热水或热甲醇，而较难溶 于冷水或冷甲醇，由此进行重结晶而精制。 芦丁— 槲皮素—
实验 红枣中黄酮类化合物（芦丁、槲皮素） 红枣中黄酮类化合物（芦丁、槲皮素） 的提取、 的提取、精制与鉴定
惠岑怿 生命与化学科学学院 化学实验中心
芦丁的提取与定性反应
概述
黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。 黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。 不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩 这类含有氧杂环 家族添加了更多色彩。 氧杂环的化合 其不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这类含有氧杂环的化合 物多存在于高等植物及羊齿类植物中。 物多存在于高等植物及羊齿类植物中。
趁热过滤
芦丁的提取与定性反应
黄 酮 苷 的 水 解
抽滤
沉淀（粗品芦丁，60℃烘干） 沉淀（粗品芦丁，60℃烘干） 烘干 滤液 均分2 均分2份
重结晶 60量加入蒸馏水 量加入蒸馏水， 按1：60量加入蒸馏水，沉 淀悬浮于蒸馏水中， 淀悬浮于蒸馏水中，加热 煮沸15分钟后， 15分钟后 煮沸15分钟后，趁热抽滤
纸色谱
芦丁的提取与定性反应
糖 的 纸 色 谱 鉴 定
标准品：葡萄糖乙醇液、鼠李糖乙醇液 标准品：葡萄糖乙醇液、 展开剂：正丁醇：醋酸： 展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5，上层） 上层） 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺显示剂，105℃烘 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺显示剂，105℃烘 箱加热10min, 10min,显棕色斑点 箱加热10min,显棕色斑点
芦丁的提取与定性反应