核心结合因子（CBF）相关性急性髓系白血病（AML）是指一组以t（8；21）和inv（16）／t（16；16）异常为特征的白血病亚型，占AML的15 %，具有独特的临床及生物学特征，通常认为预后良好，给予大剂量阿糖胞苷（Ara-C）强化巩固治疗可以使患者获得长期生存。
尽管如此，仍然有约50 %的患者复发，远期生存率仅50 %左右［1 ］，提示一些患者可能伴有不良的遗传学表型。
c-Kit、FLT3、N-ras基因突变可协同作用，共同构成“二次打击”，导致这一类型白血病的发生。
近年来同属于Ⅲ型家族的FLT3、c-Kit基因突变已核心结合因子相关性急性髓系白血病常见基因突变和细胞遗传学分析冯雅青杨永平张艳芳刘喜张利东037008 山西省大同市第三人民医院血液科通信作者：冯雅青，Email:yaqing3@DOI：10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2016.07.004【摘要】目的研究核心结合因子相关性急性髓系白血病（CBF-AML）c-Kit、FLT3基因突变发生情况及患者的核型特征。
方法采用基因组DNA聚合酶链反应（PCR）法结合碱基测序方法，检测48例CBF-AML患者初诊时c-Kit、FLT3基因内部串联重复（ITD）突变和FLT3第二酪氨酸激酶结构域（TKD）点突变发生情况及核型特征变化。
结果48例CBF-AML患者中，13例（27.1%）出现c-Kit错义突变，包括8号外显子突变5例，17号外显子突变8例。
t（8；21）AML患者c-Kit基因突变发生率高于inv（16）AML患者［33.3%（9／27）比19.0%（4／21），P＜0.05］。
1例（2.1%）患者FLT3-ITD突变，3例（6.3 ％）患者FLT3-TKD突变。
RUNX1-RUNX1T1阳性附加染色体异常的发生率达25.9%（7／27），其中性染色体缺失最为常见，CBFβ-MYH11阳性附加染色体异常发生率较低。
结论在CBF-AML中c-Kit基因突变发生率高，RUNX1-RUNX1T1阳性的附加染色体异常易见，为研究个体化治疗提供了一定的参考。
【关键词】白血病，髓样，急性；核心结合因子类；c-Kit；FLT3；细胞遗传学基金项目：山西省科技攻关项目（20140313011-1）Analysis of common gene mutations and cytogenetics in core binding factor related acute myeloidleukemia Feng Yaqing，Yang Yongping，Zhang Yanfang，Liu Xi，Zhang LidongDepartment of Hematology，the Third People's Hospital of Datong City，Datong037008，ChinaCorresponding author:Feng Yaqing，Email:yaqing3@【Abstract】Objective To assess the prevalence of c-Kit and FLT3gene mutations in core bindingfactor related acute myeloid leukemia(CBF-AML)and analyze the karyotype characteristics of the CBF-AMLpatients.Methods Mutations of c-Kit,FLT3-ITD and FLT3-TKD were detected by genomic DNA PCR andsequencing,and the karyotype changes were analyzed in48newly diagnosed CBF-AML patients.Resultsc-Kit aberrations were detected in13(27.1%)out of48patients,including5cases with exon8mutation and8cases with exon17mutation.c-Kit was more prominent in t(8；21)AML patients than in inv(16)AML patients[(33.3%(9/27)vs19.0%(4/21),P＜0.05].Only1case(2.1%)had FLT3-ITD mutation(FLT3-ITD+)and3cases(6.3%)had FLT3-TKD mutation(FLT3-TKD+).Prevalence of RUNX1-RUNX1T1with additionalchromosome abnormality was as high as25.9%(7/27),in which sex chromosome elimination was the mostcommon one,while prevalence of CBFβ-MYH11with additional chromosome abnormality was low.Conclusion c-Kit gene mutations and RUNX1-RUNX1T1additional chromosome abnormalities are commonin patients with CBF-AML and would be helpful for individualized treatment studies.【Key words】Leukemia,myeloid,acute；Core binding factor；c-Kit；FLT3；CytogeneticsFund program：Science and Technology Research Project of Shanxi Province（20140313011-1）·论著·成为分子遗传学研究的热点，探讨患者基因突变及核型对CBF-AML预后有着重要的临床意义。
1资料与方法1.1病例资料收集我院2009年10月至2015年12月住院的初治CBF-AML患者48例，其中男性30例，女性18例，中位年龄34.5岁（12～73岁），所有患者经细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学（MICM）分型确诊。
染色体核型证实存在t（8；21）或inv（16），其中，伴t（8；21）异常27例，伴inv（16）异常21例，并且证实存在相应的AML1-ETO或CBFβ-MYH11融合基因。
1.2染色体核型分析所有CBF-AML患者均进行了细胞遗传学检查，染色体标本取自患者初诊骨髓，细胞以1×106～2×106／ml接种后，直接法短期培养24 h，行染色体标本制备和R显带，根据人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN）2008描述核型，每例分析20个中期细胞。
1.3融合基因检测将所提取的RNA反转录成cDNA，RUNX1-RUNX1T1融合基因的上游引物：5'-CTACCGCAGCC ATGAAGAACC-3'，下游引物：5'-AGAGGAAGGCCCA TTGCTGAA-3'；CBFβ-MYH11融合基因的上游引物：5'-GCAGGCAAGG TATATTTGAAGG-3'，下游引物1：5'-TGAAGCAACTCCTGGGTGTC-3'，下游引物2：5'-TCCTCTTCTCCTCATTCTGCTC-3'。
经PCR扩增后取产物进行琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察结果。
1.4基因测序直接将DNA进行PCR扩增后测序，判断基因突变。
c-Kit基因第8外显子上游引物：5'-CTCCCTGA AAGCAGAAAC-3'，下游引物：5'-CAGAAAGATAACA CCAAAATAG-3'；c-Kit基因第17号外显子上游引物：5'-GCAAAGGCATATAGGAACTC-3'，下游引物：5'-GTTGTATGAATGTTCAGCATACC-3'。
FLT3基因内部串联重复（ITD）突变的检测引物包括，FLT3第14、15号外显子上游引物：5'-GCCATTTAGGTATGAAAGCC AGG-3'，下游引物：5'-CTTTCAGCATTTTGACGGCAAC C-3'。
FLT3基因第二酪氨酸激酶结构域（TKD）点突变的检测，FLT3基因第20号外显子及内含子上游引物：5'-CCAGGAACGTGCTTGTCA-3'，下游引物：5'-TCAAAAATGCACCACAGTGAG-3'。
在不同的反应条件下扩增，琼脂糖凝胶电泳分析。
1.5统计学方法采用SPSS 16.0统计学软件进行统计分析，计数资料的比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1CBF-AML患者c-Kit基因突变情况48例CBF-AML患者中，13例（27.1%）出现c-Kit 错义突变，包括点突变、插入缺失，位于Kit激酶功能域的D816突变易见，其中t（8；21）组和inv（16）组突变发生率差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。
2.2CBF-AML患者FLT3基因突变48例CBF-AML患者中，FLT3基因突变4例（8.3%）（表1）。
2.3CBF-AML患者核型特征27例RUNX1-RUNX1T1 AML患者中，20例（74.1%）单纯t（8；21），7例（25.9%）具有附加染色体异常，包括性染色体缺失3例，超二倍体1例，复合异位1例，其他2例。
21例CBFβ-MYH11 AML患者中，单纯inv（16）（p13；q22）与t（16；16）（p13.1；q22）18例，+8 1例，+22 1例，t（10；11）（p13；q13）1例。
3讨论CBF是髓系前体细胞分化的关键转录因子，CBF 家族由4个蛋白组成，包括3个α亚基（RUNX1、RUNX2、RUNX3）和1个β亚基（CBFβ），其中CBFβ和RUNX1是重要的血细胞分化调节因子和抑癌因子，它们的重排形成重现型染色体异常，世界卫生组织（WHO）血液淋巴组织肿瘤分类中将CBF-AML 列为AML伴重现性遗传学异常，t（8；21）（q22；q22）易位形成RUNX1-RUNX1T1融合基因，inv（16）（p13.1；q22）与t（16；16）（p13.1；q22）两种染色体异常形成CBFβ-MYH11融合基因。