Marker
参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。

新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。

也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象
琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?
参考见解：DNA带模糊??：
1、DNA降解??避免核酸酶污染。

2、DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。

3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。

6、DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。

好象没跑出来，是怎么回事？
参考见解：
1、根据目的条带长度来调整凝胶浓度，一般1.5％左右，也不一定。

2、紫外灯下没见带，不一定没有出孔，而是量少看不到，可以测一下浓度看一下，或直接试跑一下PCR。

3、最好加一个marker孔，尤其你第一次跑胶时。

4、电泳时间可能过长，一般75v×30min左右，但是具体看溴酚蓝的离孔距离和目的条带离孔距离。

怎样根据目测条带亮度来判断DNA浓度？
参考见解：
1、跑胶时候marker 可以加成定量marker，如1kb、100bp等marker，按说明书的量上样电泳，如加500ng量的DNA marker，电泳完毕后，就可将目的DNA条带和MARKER 条带的亮度做个大致的比较，找出两者最接近亮度的条带。

因为marker的各条带都已知所含的DNA浓度（说明书中详细注明），因此根据条带的亮度、大小大致就可推测目的DNA的浓度。

2、在通过目测DNA浓度的时候，最好要把加样量设一个梯度，比如从0。

5、2、4、6，因为，如果质粒的量很浓的话，通过简单的对一条条带的目测产生的结果误差是很大的或者利用marker(推荐DL 2000),再用软件做半定量分析。

DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？
参考见解：
1、配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm即可。

2、电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。

3、上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。

跑出的DNA带模糊？
参考见解：
1、DNA降解：避免核酸酶污染。

2、电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。

建议经常更换电泳缓冲液。

3、所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、DNA上样量过多：减少凝胶中DNA上样量。

5、DNA样含盐过高：电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

6、有蛋白污染：电泳前酚抽提去除蛋白。

7、DNA变性：电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

有不规则DNA带迁移?
参考见解：
1、对于λ/Hind III片段cos位点复性：电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟。

2、电泳条件不合适：电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液。

3、DNA变性：以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热。

跑出的DNA条带带弱或无DNA带？
参考见解：
1、DNA的上样量不够：增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低。

2、DNA降解：避免DNA的核酸酶污染。

3、DNA走出凝胶：缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度。

4、对于EB染色的DNA，所用光源不合适??应用短波长（254nm）的紫外光源。

跑出的DNA带缺失不完整是怎么回事?
参考见解：?
1、小DNA带走出凝胶??缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度。

2、分子大小相近的DNA带不易分辨??增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度。

3、DNA变性：电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM NaCl Buffer稀释DNA。

DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适??在脉冲凝胶电泳上分析。

跑完PCR，暂时不方便胶回收，条带已经切下来放到ep管里了，这个能保存么？会不会有不良影响？
参考见解：还有个问题，pcr的产物可以不可以直接拿来做模板再进行pcr。

我试过，可是总是出现一个拖尾亮条，没有带，是什么原因呢？
割下来的胶放在-20保存两个星期完全没有问题。

切下来的胶放在4度冰箱中4、5小时没有问题回收的效果也很好。

凝胶回收DNA实验的关键在哪里?
参考见解：最关键的是切胶之后,溶胶的那一步.切胶的时候要尽量把多余的琼脂糖凝胶切干净,按照实验步骤,第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分,保证凝胶已经完全溶解了.加乙醇这步也很关键，当凝胶溶解后最好多过几次柱子。

还有就是洗脱的那一步。

洗脱的时候最好用加热到60度的洗脱液洗脱，如果实在效果不好可以分两次洗脱。

切胶的时候如何能切的准呢？条带的位置肉眼很难判断出来，如何判断条带的位置呢？
参考见解：可以将产物与Marker一起电泳，染色后，在紫外灯下观察结果，跟Marker进行相比，就知道要的是哪条带。

注意，紫外灯下切胶速度要快，否则DNA会降解，另外，紫外线对身体伤害很大，特别是眼睛，请注意采取保护措施（比如在专门的箱子里切，带眼镜等）。

|||RNA用具要用10%的NaOH浸泡过液，再用DEPC水冲洗干净 70%的乙醇用过国产分析乙醇有杂质。