（一）总生物碱的初步分离
根据生物碱的碱性强弱、酚羟基的有无及溶解性能，将生物碱初步分成弱碱性、中强碱性、强碱性、水溶性、酚性、非酚性生物碱五类。
（二）单体生物碱的分离
1、利用生物碱碱性的差异进行分离
一般采用PH梯度萃取法
1）将总碱溶于酸水，调PH7、8、9、10，每调一次PH值，用氯仿等亲脂性有机溶剂萃取一次；（弱碱先萃取出）
授课
对象
系别药学系讨论□
示教□
其他□
课程
类型
理论课
实验课□
见习课□
其他□
题目
生物碱的检识、提取与分离方法
课时安排
2学时
教学
目的
要求
1、掌握生物碱检识方法。
2、掌握生物碱的提取方法。
3、熟悉生物碱的分离原理与方法。
4、掌握生物碱的单体分离。
教学内容
重点（*）
难点（#）
疑点（?）
3、利用生物碱特殊功能基不同进行分离
如：吗啡与可待因的分离
吗啡为酚性生物碱，可溶于NaOH溶液中，而可待因属于非酚性生物碱不溶于NaOH溶液，因此可用NaOH溶液进行分离。
4、利用色谱法进行分离
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5、水溶性生物碱的分离
包括季铵碱及含有较多极性基团的小分子生物碱。可采用下列方法除去水溶性杂质。
课程名称：中药化学编号：3
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（三）两性生物碱
具有酚羟基、羧基、内酯或内酰胺结构的生物碱类。
五、沉淀反应
生物碱在酸水中（苦味酸除外）或稀醇中与某些试剂生成难溶于水的复盐或配合物的反应，称为生物碱的沉淀反应。与生物碱形成沉淀的化学试剂称为生物碱沉淀试剂。利用该反应可预测中药是否存在生物碱；也可用于提取与分离。
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的检识和区别个别生物碱。
常用的显色剂与现象见表3-2常用的生物碱显色反应
七、色谱检识
薄层色谱
吸附剂：硅胶、氧化铝
展开剂：以苯、氯仿为主
因硅胶为弱酸性，因此需加碱处理：
1、在湿法铺板时加一定量的NaOH溶液，使板呈碱性。
2、在中性展开剂中加入一定量的二乙胺或氨水（如氯仿-二乙胺9﹕5或9﹕1）
3、在层析槽中放一盛有氨水的小杯。
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第三节提取与分离方法
一、提取方法
生物碱在生物体内存在形式多样，在提取时，应考虑生物碱的性质和存在形式，选择适宜的提取溶剂和方法。除个别具有挥发性或升华性的生物碱（如麻黄碱）可用水蒸气蒸馏法提取外，大多数用溶剂提取法。
（一）溶剂法
1、水或酸水提取法
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2）将总碱溶于氯仿中，依次用PH7、6、5、4、3的酸水液依次萃取；（强碱先萃取出）
2、利用各生物碱（盐）极性差异（溶解度差异）进行分离
1）如从苦参总生物碱液中分离出氧化苦参碱
在苦参总碱的氯仿溶液中，加入约10倍量的乙醚，可使氧化苦参碱沉淀析出。因氧化苦参碱为苦参碱的氮氧化物，亲水性强，在乙醚中溶解度很小。
1）沉淀法：常用雷氏铵盐沉淀法
利用季铵型生物碱与雷氏铵盐沉淀试剂生成雷氏复盐，难溶于水而沉淀析出，将季铵型生物碱从碱水层中提取出来。
具体操作：将碱水液加盐酸调PH2左右，加入新配制的雷氏铵盐饱和水溶液，等沉淀完全，滤过；得到的沉淀加少量的水洗后，加丙酮（或乙醇）溶解，滤除不溶物，将丙酮液通过氧化铝柱净化，用丙酮洗脱，收集丙酮洗脱液，加入硫酸银饱和水溶液，生成生物碱硫酸盐和雷氏银盐沉淀，滤过后向溶液中加入计算量的氯化钡溶液，转化为生物碱盐酸盐和硫酸钡沉淀，滤过，滤液蒸干即得水溶性生物碱盐酸盐。反应过程如下：
（1）适用范围：一般用水溶性生物碱及生物碱盐的提取。
（2）提取法：浸渍法、渗漉法。
（3）优缺点：操作简便、成本低；但体积大、浓缩困难、易霉变、水溶性杂质多，分离困难。
酸水提取液可以采用下列方法进一步处理：
（1）阳离子树脂交换法
生物碱的酸水提取液通过离子交换树脂。生物碱盐以阳离子的形式交换到树脂上，而中性、酸性杂质（如糖类、有机酸）不被交换，可随溶液流出树脂柱，从而达到分离的效果。交换完后可用氨水或用稀酸水溶液进行洗脱，可分别得到游离生物碱或生物碱盐。
优缺点：可分离出碱性大小不同的生物碱，纯度高，溶剂用量少，树脂亦可反复使用；但易受金属离子等阳离子型化合物、氨基酸和蛋
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白质等两性化合物的干扰。
（2）萃取法
将酸水提取液碱化，生物碱盐转变为游离生物碱而析出，可直接滤得。或用氯仿、乙醚、苯等有机溶剂萃取，分取有机溶剂层，回收溶剂，即得总生物碱。
时间分配
(分钟)
提问/举例/教具
复习
5
提问
第三节检识方法
25
举例
一、沉淀反应
*
二、显色反应
三、色谱检识
第四节提取与分离方法
一、提取方法
*
30
举例
1、水或酸水提取法
2、醇类溶剂提取法
3、亲脂性有机溶剂提取
二、分离方法
1、总生物碱的初步分离
25
2、生物碱单体的分离
*
举例
小结
5
讨论、思考题、作业：
1、常用生物碱沉淀试剂有哪些？哪些化学成分干扰生物碱沉淀反应？进行沉淀反应有哪些注意事项？
（二）醇类溶剂提取法
生物碱及其盐可用60%~95%乙醇或酸性乙醇溶液提取，常采用浸渍法、渗滤法或回流提取法。该法适用于各种极性生物碱的提取，水溶性杂质少，浓缩方便，但脂溶性杂质较多，常含有树脂及脂溶性色素等，需进一步处理。
（三）亲脂性有机溶剂提取
可用于提取游离型生物碱。
二、分离方法
分离生物碱主要是利用总碱中各生物碱（盐）的溶解性不同，碱性强弱的不同，极性差异及特殊官能团进行的。
消除方法：可先在酸水液中加碱碱化后用氯仿萃取出生物碱，使生物碱一蛋白质等水溶性杂质分离；在氯仿萃取液中再加酸水萃取出生物碱，然后再进行生物碱沉淀反应；也可采取薄层色谱或纸色谱方法。
5、由于生物碱对各种沉淀试剂灵敏度不同，所以通常彩三种以上试剂进行检测。
六、显色反应
生物碱可与生物碱显色试剂反应生成不同的颜色，可用于生物碱
此外，还可用溶剂法和离子交换树脂法分离水溶性生物碱类。
生物碱沉淀试剂根据生成物不同可分成三种类型：
1、生成不溶性盐类：如硅钨酸试剂、苦味酸试剂、磷钼酸试剂等；
2、生成疏松的配合物：如碘-碘化钾试剂；
3、生成不溶性加成物：如碘化铋钾、碘化汞钾等一些重金属盐类。
详见课本表3-1常用的生物碱沉淀试剂
注意点：
4、反应会出现假阳性现象。
假阳性现象一般出现在水溶液中，主要受到一些水溶液性杂质的干扰，如中药酸水提取液中的蛋白质、氨基酸、多肽、鞣质等。
2、如何应用离子交换树脂提取分离生物碱？
3、生物碱单体的分离有哪些？其原理是什么？
4、生物碱的提取分离方法有哪些？
参考书目：
李端主编.中药化学.第1版.（全国中医药高职高专卫生部规划教材）北京：人民卫生出版社，2006
吴剑峰主编.天然药物化学.第1版.北京：人民卫生出版社，2006
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2）防已诺林碱和粉防已碱的分离是利用其极性的差异
由于防已诺林碱比粉防已碱多一个隐性的酚羟基，极性较大，在苯吕的溶解度较小，因此可用冷苯分离防已诺林碱和粉防已碱。
3）除了上述外，还可利用生物碱盐比生物碱易于结晶，利用其盐在溶剂中溶解度的差异进行分离。如士的宁和马钱子碱的分离；麻黄碱和伪麻黄碱的分离等。