恰当的方法有助于提高单基因病致病突变的检出率。
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案例二、脑白质病变
简要病史描述：一对夫妻结婚后生育一患儿，六岁不能行走。 先证者主诉：出生至今不能跑跳、独走 病史：系G2P1足月剖宫产，产时无窒息，出生即哭声低弱，吸吮无力，6月会竖 头，2岁以后会坐，至今不能独走、跑跳，可短时独站十余秒，近1-2年有倒退， 智力正常。 体格检查：头围52cm，神清，心肺腹无异常，双上肢近端肌力III级，远端肌力 III+级，双下肢肌力IV级，膝腱反射、跟腱反射可引出（减弱），跟腱挛缩，平卧 不能爬起，腓肠肌无肥大，颌关节挛缩，牙齿咬合不全。 患儿临床诊断：先天性肾上腺脑白质营养不良。 基因检测结果：相关基因ABCD1未发生突变。 女方再次怀孕，生育出一名疑似患者，主要表现为6个月不能抬头。
图片来源：瓷娃娃罕见病关爱中心 /#200
4
肌肉、神经疾病
包括：肌肉疾病、神经肌肉接头疾病、周围神经疾病和运动神经元疾病。
常见疾病有：周围神经病、重症肌无力、多发性肌炎、周期性瘫痪、肌营养不 良症、影响神经系统的代谢病（如苯丙酸尿症、糖原贮积病、粘多糖病)、变 性病（如脑白质营养不良、肌萎缩侧索硬化）。
肢带型肌营养不良2B型：DYSF基因存在2个剪切突变，c.144+1G>A 和c.342+1G>T杂合突变
患者 正常人
患者 正常人
撒网式的基因panel有助于寻找致病基因，辅助临床明确或修正诊断。
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骨骼肌肉神经系统单基因病的预防
婚前检查 携带者的
肌肉
骨骼-肌肉 -神经疾病
骨骼
神经 接头
该类种类繁多，仅神经类疾病约占疾病总数 60%*，国内神经系统单基因遗传病患病率 约就高达110/100万。
*引自《神经遗传病学》刘焯霖 2011
骨骼疾病
骨骼是组成脊椎动物内骨骼的坚硬器官，具有运动、支持和保护身体，制造红血 球和白血球，以及储藏矿物质的功能。
目标序列捕 获+高通量
测序
可同时检测多个样本、多个疾病、多个基因、
高效、准确、可发现新突变
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骨骼肌肉神经系统单基因病分类—10大类，117种疾病，278个基因
先天性软骨发育不全， 成骨不全等
苯丙酮尿症， 甲基丙二酸血症等
遗传代
谢病
Rett综合征， 综合征
马凡综合征等
及其他
神经皮
神经纤维瘤病， 结节性硬化病
/zhuanjiaguandian/guanyuqingww_115884.htm
神经遗传病诊断
染色体检查
病理检查
电生理检查
生化检查
免疫技术
影像学检查
细胞学检查
细胞培养
基因检测
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基因检测的必要性
1、提供诊断依据
• 提供诊断和治疗的依 据
预防严重残障
• 对非致死性疾病早发 现、早干预
神经系统单基因遗传病基因检测
骨骼肌肉神经系统
主
要
内
主
容
1 骨骼肌肉神经ห้องสมุดไป่ตู้统疾病现状
要 内
容
2 我们能做什么？
3 重点疾病小知识
什么是骨骼-神经-肌肉病？
狭义： 是骨骼、骨骼肌、支配骨骼肌的神经以及神经肌肉接头疾病的总称。 广义： 全身疾病导致的继发性的骨骼肌肉神经组织的结构和功能障碍性疾
病的总称。
半乳糖脑苷脂酶
Karbbe脑白质营养不良
β-葡糖脑苷脂酶
Gaucher Disease
α-半乳糖脑苷脂酶
Fabry Disease
酸性α-葡萄糖苷酶
Pompe Disease
芳香硫酸酯酶A（ASA） MLD
酸性鞘磷脂酶（ASM） Niemann pick's Disease
➢ 血尿代谢筛查 正常，脂酰肉碱 正常，
运输/保存
新鲜全血 5ml
保存于EDTA抗凝采血管中，充分颠倒混匀，避免
婴幼儿2ml 凝固，冰袋/干冰运输。室温放置不超过3天。
冻存全血 5ml
保存于EDTA抗凝采血管中，-20℃保存不超过2年， 反复冻融不超过5次。
DNA
≥6ug
溶液：-20℃保存不超过2年，尽量避免反复冻融。 干粉：-20℃保存，较溶液稳定，建议采用此形式。
先天性肌营养不良1A型背景介绍
先天性肌营养不良1A型
(congenital muscular dystrophy 1A, MDC1A)
肌酶 肌电图 头颅核磁
遗传方式：常染色体隐性遗传 致病基因： LAMA2
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生育指导
EX5del/wt
c.2045_2046delAG/wt
解决方案
EX5del/c.2045_2046delAG
• 对技术要求较高 • 有些类型的病理改变轻微
– 面肩肱型肌营养不良
骨骼肌肉神经病治疗现状
• 大部分周围神经病、重症肌无力、多发性肌炎、周期性瘫 痪及中毒、代谢性肌肉病等，如及时确诊、正确治疗，都 是可以治好的；
• 而一些目前还没有特效治疗方法的疾病，如遗传性周围神 经病、进行性肌营养不良症等，如果得到确诊，可避免辗 转就医造成的经济损失；可通过遗传咨询和产前诊断防止 家庭中再有患病儿出生；一旦有新的特效治疗方法出现， 将优先得到治疗机会。
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诊断思路
脑白质病变 肌肉疾病
继发性 原发性
缺氧 自身免疫性 感染 代谢性疾病 脑血管病 肿瘤 中毒性
遗传性脑白质病
肌营养不良 肌病 肌炎
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LAMA2： 父亲： p.Lys682LysfsX22,c.2045_2046delAG
Sanger验证
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定量PCR验证
对照 母亲 父亲 先证者 EX5存在缺失 2
• 起病隐匿，不易及时发现疾病、及时治疗
– 疾病初期症状表现可能不明显，不能引起重视，明确诊断时，一般病情已发展 较为严重
• 疾病种类繁多，表现复杂，诊断困难（表型异质性）
– 相同疾病的临床表现可能不同；相同的临床表现也可能是不同的疾病 – 易误诊或漏诊
• 病理诊断效果受取材部位影响非常大
– 晚期病人，肌电图显示放点高的部位可能实际上已经严重萎缩，肌活检可能 “未见肌纤维”
发作性共济失调,
调 共济失调性毛细血管扩张症等
肝豆状核变性,
肌张力障碍等
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服务流程及样品要求
服务流程
受检者 神经科检查
根据需要进 行基因检测
医生指导知 情同意
华大临检中 心收样
检测
样本采集、 运输
出具报告并 发放
收费
医生负责报 告解读
周期：20个工作日
>100个基因的产品需 35个工作日
样本要求 样本类型 体积/总量
EX5del/c.2045_2046delAG
自然怀孕+产前诊断 领养 供精/供卵 PGD单基因+产前诊断
准确的临床诊断，有利于寻找致病基因，指导下一胎生育。
参考文献: Guicheney P, et al.PCR based mutation screening of the laminin alpha2 chain gene (LAMA2): application to prenatal diagnosis and search for founder effects in congenital muscular dystrophy. J Med Genet. 1998 Mar;35(3):211-7.
症状: • 四肢肌肉无力、萎缩 • 麻木、易疲劳 • 肌肉疼痛 • 发音和吞咽困难 • 甚至因呼吸肌无力而死亡 • 行走不稳定、瘫痪
• 智能发育不全、痴呆
• 行为异常、感觉异常 • 语言障碍
原发性肌张力障碍的划指动作
• 不自主运动、抽搐、共济失调
• 脊髓受压、脑脊液压力增高
先天性肌强直症
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诊断困难、治疗困难
➢ 极长链脂肪酸 正常。
➢ 头颅MRI提示白质异常，胼胝体、脑干正常 ➢ 脑电图正常 ➢ 肌电图提示肌源性损害
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家族史
其弟: • 足月，剖宫产，产时无窒息，出生时家长即觉患儿吸吮无力，吃奶慢，哭声
低弱，活动少，不会蹬被子，家长自觉患儿活动少 ，60天可竖头但不稳，3 月可逗笑，6月不能抬头， 9月不能独坐，康复治疗近1月觉好转。 • 查体：头围40cm，四肢肌力IV级，肌张力低，双侧膝反射、跟腱反射未引出， 颅神经检查未见异常，仰卧拉起时可竖头，俯卧时不能竖头 。 • 肌酶 AST:152 U/L，LDH-L755 U/L，LDH-1 113 U/L，CK 5354 U/L，CKMB 197 U/L。 • 肌电图提示肌源性损害 • 4月时MRI正常 • 头颅见白质异常， 胼胝体、脑干正常 • 肌肉见腓肠肌、 大腿内侧肌群异常信号
测序分析 序分析
新突变, 通量低
致病位点多的单基因遗传病
MLPA
利用探针杂交、 高灵敏度，简单，快 连接反应及 速，不能检出新突变 PCR扩增
适用于检测基因的缺失或重 复，不适合检测点突变，不
能检测染色体平衡易位
筛查谱窄，通量低，费时费力
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基因诊断 ——目标区域捕获高通量测序技术
MLPA、 一代测序
骨骼疾病可由遗传、损伤、炎症或感染等因素引起。 常见的遗传性骨骼疾病有： 多发性骨骺发育异常、成骨不全、先天性软骨发育不全、假性软骨发育不全、骨 硬化症、婴儿骨皮质增生症等。
成骨不全（Osteogenesis imperfecta）又称脆骨病、 瓷娃娃，患儿骨骼极其脆弱，易骨折，轻微碰撞也会 造成严重的骨折，发病率约6:10万~7:10万。该病还 有蓝巩膜，牙本质发育不全，听力丧失和脊柱侧弯的 特点。该病临床差异很大，轻者可无症状，正常身高， 通常寿限，仅轻度易发骨折；重者残废，甚至死亡。