12级生物化学实验2期末复习题-考试生物化学实验（2）理论习题一、名词解释题1、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的点泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。

当蛋白质的分子量在15KD到200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系，可以用来测定蛋白质亚基的分子量。

2、电泳：带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳3、层析分离技术：是一种物理的分离方法，利用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同的程度分布在两个相中。

4、吸附色谱法：利用同一吸附剂对混合物中不同成分吸附能力的差异，从而使各成分达到分离目的的色谱法。

5、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。

6、分配层析：根据一种或多种化合物，在两种不相融合的溶剂间的分配来分离物质的方法。

7、亲和层析：是利用生物活性物质之间的专一亲和吸附作用而进行的层析方法。

是近年来发展的纯化酶和其他高分子的一种特殊的层析技术。

8、凝胶层析（凝胶色谱）：混合物随流动相经过凝胶层析柱时，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。

9、电渗作用：指在电场作用下液体(通常是水)相对于和它接触的固定的固体相作相对运动的现象。

10、担体：担体是一种化学惰性的，多孔性的固体微粒，能提供较大的惰性表面，使固定液以液膜状态均匀地分布在其表面。

11、死时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间.。

12、保留时间：被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间。

13、高效液相色谱法：，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

二、填空题1、蛋白质分离常用的色谱法有（纸色谱法），（离子交换色谱），（疏水色谱法）和（免疫亲和色谱法）。

2、离子交换分离操作中，常用的洗脱方法有（提高离子强度）和（调节pH值）。

3、根据分离机理的不同，色谱法可分为（吸附色谱），（离子交换色谱），（凝胶色谱），（分配色谱）和（亲和色谱）。

4、聚丙烯酰胺凝胶由（单体丙烯酰胺）和（甲叉双丙烯酰胺）聚合而成，聚合时以（过硫酸铵(APS)）为催化剂，以（四甲基乙二胺(TEMED)）为加速剂。

5、离子交换树脂主要分为（阳离子交换树脂）和（阴离子交换树脂）两类6、气相色谱仪的核心部件是（色谱柱(包括固定相)和检定器）。

7、SDS-PAGE电泳中，SDS的作用是（阴离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠），β-巯基乙醇的作用是（破坏蛋白质的二硫键）。

8、不连续体系的SDS-PAGE电泳分离蛋白质时，具有（分子筛效应）、（）、（）三种效应。

9、食品中亚硝酸盐含量测定中，硼酸主要起到（缓冲溶液的作用）和（）的作用。

10、亚硝酸盐提取过程中，加入的亚铁氰化钾及硫酸锌的作用是（沉淀蛋白质）。

11、亚硝酸盐作为食品添加剂允许在食品加工中限量使用，具有（）、（）、和产生风味的作用。

12、亚硝酸盐提取过程中，制作标准曲线时，先在弱酸条件下在亚硝酸盐中加入（），然后再加入（），偶合形成（）染料后，用分光光度法进行测定。

13、凝胶层析中，先被洗脱下来的是相对分子质量（大）的分子，而SDS-PAGE中跑的快的是相对分子质量（小）的分子。

三、选择题1、下面关于SDS的说法正确的是：（ A ）A、常用的变性剂B、常用的提取试剂C、常用的盐析剂D、常用的萃取剂2、琼脂糖凝胶孔径由（ B ）决定的A、交联度B、琼脂糖浓度C、琼脂糖密度D、颗粒大小3、HPLC是哪种色谱的简称：（ C ）：A、离子交换色谱B、气相色谱C、高效液相色谱 D、凝胶色谱4、针对配基的生物学特异性的蛋白质分离方法是：（ C ）A、凝胶过滤B、离子交换层析C、亲和层析D、纸层析5、盐析法沉淀蛋白质的原理是：（ B ）A、降低蛋白质溶液的介电常数B、中和电荷，破坏水膜C、与蛋白质结合成不溶性蛋白D、调节蛋白质溶液pH到等电点6、蛋白质分子量的测定可采用一下哪种方法：（ D ）A、离子交换层析 B.、亲和层析 C、凝胶层析 D、聚酰胺层析7、电泳时 pH 值、颗粒所带的电荷和电泳速度的关系，下列描述中正确的是：（ D ）A、pH 值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越慢B、pH 值离等电点越近，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快C、pH 值离等电点越远，颗粒所带的电荷越少，电泳速度也越快D、pH 值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快8、醋酸纤维素薄膜电泳的特点是：（A ）A、分离速度慢、电泳时间短、样品用量少B、分离速度快、电泳时间长、样品用量少C、分离速度快、电泳时间短、样品用量少D、分离速度快、电泳时间短、样品用量多9、聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，其优点是：（）A、机械强度好、弹性小、无电渗作用、分辨率高B、机械强度好、弹性大、有电渗作用、分辨率高C、机械强度好、弹性大、有电渗作用、分辨率低D、机械强度好、弹性大、无电渗作用、分辨率高10、人血清清蛋白的等电点为4.64，在pH=7的溶液中向哪极移动：（ A ）A ：正极移动；B：负极移动；C：不移动；D：不确定。

11、凝胶色谱分离的依据是：（B ）。

A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同C、各物质在流动相和固定相中的分配系数不同D、各物质与专一分子的亲和力不同12、阴离子交换剂：（ C ）。

A、可交换的为阴、阳离子B、可交换的为蛋白质C、可交换的为阴离子D、可交换的为阳离子13、分配层析中的载体（ C ）。

A、对分离有影响B、是固定相C、能吸附溶剂构成固定相D、是流动相14、吸附色谱分离的依据是：（ A ）。

A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同C、各物质在流动相和固定相的分配系数不同D、各物质与专一分子的亲和力不同15、下面哪一种是根据酶分子专一性结合的纯化方法（ A ）。

A、亲和层析B、凝胶层析C、离子交换层析D、盐析16、下列关于正相色谱与反相色谱说法正确的是：（C ）A、正相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性B、正相色谱层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度慢C、反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性D、反相色谱层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度慢17、通过改变pH值从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来，可使用：（ A ）A、阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱B、阳离子交换剂一般是pH值从高到低洗脱C、阴离子交换剂一般是pH值从低到高D、以上都不对18、气相色谱的载气不能用：（ D ）A、氢气B、氦气C、氮气D、氧气19、高效液相色谱仪的种类很多，但基本上都是由（ D ）组成。

A、高压输液系统、进样系统、分离系统、过滤系统、记录系统或色谱工作站等五大部分B、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统或色谱工作站四大部分C、高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统四大部分D、高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统或色谱工作站等五大部分20、影响电泳分离的主要因素：（ B）A、光照B、待分离生物大分子的性质C、湿度D、电泳时间21、在凝胶过滤（分离范围是5000~400000）中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下来：（ B ）A．细胞色素C（13370）B．肌球蛋白（400000）C．过氧化氢酶（247500）D．血清清蛋白（68500）E．肌红蛋白（16900）22、气相色谱柱主要有：（ C ）A、填充柱B、毛细管柱C、A或BD、A或B及其他23、高效液相色谱是一种快速、灵敏、高效的分离技术，该技术可用于：（）A、分配柱层析B、离子交换柱层析C、吸附柱层析D、上述各种柱层析四、简答题1．试述凝胶层析分离蛋白质的原理？答：将待分离蛋白溶液加在事先填充好的凝胶柱上，用流动相连续不断的洗脱。

由于凝胶颗粒自身是一种具有三维网状的结构，因此对于分子量较大的蛋白质分子无法进入凝胶颗粒孔隙内部的大分子直接被洗脱下来，分子量小的蛋白质分子因为可以进入凝胶孔隙内部而受到很大的阻滞，最晚被洗脱下来，而中等大小的分子，虽然可以进入孔隙内部但并不深入，受到的阻滞作用不强，因而在两者之间被洗脱下来。

2、不连续SDS-PAGE中分离蛋白质时，样品为什么会出现浓缩效应？（1）凝胶孔径的不连续性：浓缩胶为大孔胶，分离胶为小孔胶。

在电场作用下，样品颗粒在大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻力大，移动速度减慢。

因而在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压缩成很窄的区带。

（2）缓冲体系离子成分及pH值的不连续性：HCl 在任何pH溶液中均易解离出(Cl-)，在电场中迁移率快，走在最前面称为快离子。

在电极缓冲液中，除有Tris 外，还有甘氨酸(glycine)，其pI=6.0，在pH8.3的电极缓冲液中，易解离出甘氨酸根(NH2CH2COO-)，而在pH6.7的凝胶缓冲体系中，甘氨酸解离度仅有0.1%-1%，因而在电场中迁移很慢，称为慢离子。

当进入pH8.9的分离胶时，甘氨酸解离度增加。

（3）电位梯度的不连续性：电泳开始后，快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低的低电导区，使局部电位梯度增高，将蛋白质浓缩成狭窄的区带。

4、气固色谱和气液色谱的分离原理是什么？气固色谱的固定相是多孔性的固体吸附剂颗粒。

固体吸附剂对试样中各组分的吸附能力的不同。

因此其分离原理即被分离组分在固体吸附剂中的吸附与脱附的不断重复过程。

气液色谱的固定相由担体（用来支持固定液的化学惰性的固体）和固定液（高沸点有机化合物）所组成。

固定液对试样中各组分的溶解能力的不同。

因此气液色谱分离的原理就是被分离组分在气液两相间的反复多次分配过程。

5、液相色谱中选择流动相时应注意什么问题？（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。

（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。

如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。

（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。

（4）流动相同时还应满足检测器的要求。

当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。

6、简述聚丙烯酰胺凝胶电泳特点及应用范围。

答：特点：具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小（1μg～100μg）、分辨率高等。