【思考题】
1. 为什么酶液的提取要在冰浴中进行？ 2. 各管中美蓝的褪色情况有何不同？为什么？
2
2
2
0.01%美蓝溶液（滴） 5 5
5
3. 将各试管摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加 液体石蜡5滴，盖在液面，以隔绝空气。置于 370C水浴中保温，随时观察各管中美蓝的褪色 情况，并记录时间，解释结果。
【要点提示】
1. 提取酶液需在冰浴中进行，以防酶失活。 2. 实验过程中，需快速加入试剂，摇匀后迅 速加入液体石蜡。 3. 加液体石蜡的目的是为了使反应液与空气 隔绝，因此加液体石蜡时需斜执试管，沿管壁 加入，不要产生气泡。 4. 加完液体石蜡后，在观察结果的过程中， 不要摇动试管，以免溶液与空气接触而使美蓝 重新氧化变蓝。
生物化学实验之－－
实验五 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制
山东师范大学生命科学学院
【实验目的】
了解丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 作用。
【实验原理】
由于丙二酸与琥珀酸结构相似，可以竞争性 地抑制琥珀酸脱氢酶对于琥珀酸的脱氢作用。
在生物体内，肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶， 能催化琥珀酸脱氢转变成延胡索酸，同时放出大 量能量供肌体利用。
在生物体外，可以人为地提供无氧的条件进 行实验，反应中生成的FADH2可使氧化型美蓝 （蓝色）转变成还原型美蓝（无色）。因此，可 以从美蓝的颜色变化观察琥珀酸脱氢酶的作用。
FAD
FADH2
CH2COOH + 美蓝
CH2COOH
琥珀酸脱氢酶
CHCOOH ＋ 美蓝－2H
CHCOOH
琥珀酸
氧化型（蓝色）
延胡索酸
还原型（无色）
【器材与试剂】
（一）器材 1. 恒温水浴锅 3. 研钵 5. 试管架 7. 漏斗 9. 脱脂棉
2. 手术剪 4. 试管 6. 刻度吸管 8. 小白鼠的肌肉 10. 吸水纸
（二）试剂 1. 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2. 0.02mol/L丙二酸钠溶液 3. 0.02mol/L琥珀酸钠溶液 4. 0.01%美蓝溶液 5. 生理盐水 6. 液体石蜡
【实验步骤】
1. 制备肌提液（酶液）：取新杀死的动物肌肉 3～5g，加冷的磷酸缓冲液研磨，过滤，低温保 存，备用。
2. 取试管3支，按下表操作。
试剂
试管编号
12
3
肌提液 （ml）
2 2 2（煮沸）
0.02mol/L丙二酸钠 溶液（ml）
—
1
—பைடு நூலகம்
蒸馏水（ml）
1—
1
0.02mol/L琥珀酸钠 溶液（ml）