2.特殊成分： 生长因子：核苷酸、碱基、维生素等
注：含CHON的有机物微是生物异的实验养室培型养实微验 生物的碳源、氮源、能源
一.培养基：微生物生存的环境和营养物质
1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 2.特殊营养：维生素、碱基等（生长因子）
（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）
3.pH、氧气的需求：
4.种类：物理性质：
固体培养基
有无 凝固剂琼脂
液体培养基
分离 化学成分：天然培养基 工业
鉴定
合成培养基 生产
微生物的实验室培养实验
牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 琼脂20.0g 牛肉膏 5g
蛋白胨 10g Nacl 5g H2O 定容至1000ml
分析营养构成？
微生物的实验室培养实验
一.培养基：微生物生存的环境和营养物质
思考：微生物“吃”什么？
1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源：CO2、CO32-、HCO3有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等
自养微生物 异养微生物
⑵氮源
无机氮源：N2、NH4＋、NO3-（为硝化细菌提供N源和能源） 有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手 时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污染培养基。
微生物的实验室培养实验
酒精灯旁操作
超净工作台
微生物的实验室培养实验
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形 成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽 孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶 劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的 细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。 芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境 适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽 孢又可以萌发，形成一个细菌
到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关
微生物的实验室培养实验
病毒:
无细胞结构
原核生物: 细菌、蓝藻 原核细胞 微生物的类群 原生生物：单细胞的动植物
如草履虫、单细胞藻类等 真核细胞
真菌: 如酵母菌
微生物的实验室培养ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验
专题2 微生物的培养与应用
课题1
微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染
消毒
灭菌
较为温和理化方法， 强烈的理化方法， 定义 杀死部分有害菌体 杀死所有微生物
（不包括芽孢、孢子） （包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法
灼烧灭菌
方法 巴10氏0℃消、毒5法~6min 化70学~7药5℃剂、30min
接金耐干种属高热环 用温 灭、 具需 菌接保种持针干等燥的
酒紫8精0外℃、线、氯1气5m、in石炭酸等
细菌、原生动物、真菌和植物 等产生的一种有繁殖作用的生 殖细胞。能直接发育成新个体。
微生物的实验室培养实验
菌落
1.定义： 单个 固体培养基上 或少数菌体 大量繁殖
2.特征：大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。
3.功能： 鉴定菌种的重要依据
子细胞群体
微生物的实验室培养实验
三.大肠杆菌的纯化培养：分散成单个细胞,形成单个菌落
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。
微生物的实验室培养实验
二.斜面接种和培养大肠杆菌：
1、斜面接种大肠杆菌的目的： 菌种转移、扩大培养、保存纯净菌种等
2、步骤： a、点燃酒精灯 b、灭菌接种环 c、试管管口过火 d、挑取菌种 e、接种划线 ----S型曲线 f、试管口和接种环过火灭菌 g、培养大肠杆菌----恒温箱（37℃）培养24h
物高品压， 蒸汽16灭0～菌170℃ 1培～养2小基时，
100KPa、
微生物的实验室培养实验 121℃、15～30min
高压蒸汽灭菌锅的使用步骤： 1、加水：使用前加人适量的水 2、装锅：待灭菌的物品放在灭菌锅内，盖好锅盖，旋紧固
定螺栓，打开排气阀。 3、加热排气：目的排尽其中的冷空气，关闭排气阀。 4、保温保压：100KPa、121℃、20-30min. 5、出锅：压力表为0时微生，物的温实验度室培60养℃实验打开排气阀，开盖取出物品。
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或 灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
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二.无菌技术：防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌：
2.无菌范围：实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.计算：培养基用量 依配方计算各成分的用量
2.称量：牛10肉00膏ml黏牛稠肉，膏用蛋称白量胨纸培称养取基的配方 牛肉膏、蛋白琼胨脂易2吸0.0潮g ，要快、加盖
3.溶化：牛肉膏、称量牛纸肉膏、少5量g 水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、蛋N白aC胨l→琼10脂g →补水定容
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？
微生物的实验室培养实验
5. 配制原则
生产 科研
⑴目的明确：根据微生物的种类、培养目的选择原料
自养型：不加碳源（CO2碳源） 异养型：有机碳源
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当
⑶适宜的pH值：加入缓冲剂
细菌偏碱（7-8），真菌偏酸（5-6）
微生物的实验室培养实验
二.无菌技术：防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌：
微生物的实验室培养实验
4.调pH、分装、包扎：Nacl 5g 5.灭菌：培养基、H培2O养皿定容至1000ml 6.搁置斜面或倒平板：
微生物的实验室培养实验
温度冷却至50℃左右将试管枕在1cm的木条上，斜面长度 不超过试管总长的1/2
微生物的实验室培养实验
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 微生物的实验室培养实验