河南省科技攻关计划项目申请书Luo Bin jie姓名：项目名miRNA与膀胱癌诊断，临床治疗的相关研究称：单位郑州大学：联系电话：填报说明请根据自己的专业及研究方向，针对某具体临床问题，结合所学习临床科研方法的一种或几种写出一份科研设计。

完成后，文件以个人姓名命名，。

考核成绩依设计书优略评定。

截至日期2013年11月8日。

、项目的立项依据和意义（说明国内外相关领域技术发展水平和趋势等）全国肿瘤登记地区膀胱癌发病率为10万，世界人口标化发病率（世标率）为10万，膀胱癌居中国男性泌尿生殖系恶性肿瘤发病率第1位，居中国恶性肿瘤发病率第8位，居中国男性恶性肿瘤发病率第6位，全国肿瘤登记人口膀胱癌发病率，呈现逐年增长趋势］1］。

孙思邈《千金要方•卷一•诊候》：“古之善为医者，上医医未病之病，中医医欲病之病，下医医已病之病。

在医学如此高速发展的今天，我们显然不会满足大多数“发现无痛性肉眼血尿--进行膀胱镜检--再行手术切除一膀胱灌注”的这一套最常见的膀胱癌诊治流程。

介入科韩新巍教授说过未来医学是微创和介入医学的为主导的，内外科为辅助的医学。

显然对miRNA的探求能对膀胱癌的诊治带来前所未有的契机。

微小核糖核酸（microRNA，miRNA在转录后水平对基因的表达进行调控。

miRNA在膀胱癌的演进过程中发挥着类似于癌基因或抑癌基因的作用。

目前研究表明，对miRNA的调控可为临床膀胱癌的诊治提供一个新的靶点，提高膀胱癌患者的远期生存率和生活质量］2］1:关于miRNAmiRNAs是一类大小为19个〜25个碱基的单小分子RNA在细胞核内，它本身不编码蛋白，但是可调节其他基因的翻译表达。

miRNA初级产物在RNA聚合酶U作用下合成miRNA转录前体（Pri - miRNA ，然后经RNA聚合酶川（Drosha酶）和DGC R 蛋白加工后，形成发卡环结构的miRNA前体（Precursor miRNA ，premiRNA，最终被转运体Exportin 5转运至细胞质，由核酸酶Dicer剪切形成RNA诱导的沉默复合体（RNA in duced sile nci ng complex，RISC）。

miRNA通过与靶mRNA!异碱基配对而引起靶miRNA 的降解或翻译抑制，在转录后水平调控基因表达，从而调控肿瘤细胞的增殖和凋亡。

细胞可分泌含miRNA的复合物进入体液，如尿液、血液、唾液、母乳。

一种miRN可靶向一个或者多个mRNA多种miRNA也可同时靶向一个mRNA因此，异常表达的miRNA不仅能致癌而且有肿瘤抑制的功能。

2: miRNAf膀胱癌的关系的研究趋势及范围表1:部分膀胱癌相关miRNAs的差异表达（数据来源于《miRNAs在膀胱癌诊治中的研究进展》）miRNA miRNA 表达变化推测靶基因表2: miRNA表达水平变化与膀胱尿路上皮癌的关系]3] 表3: miRNA家族的一些机制细分3.国内外相关研究成果I : miRNA与膀胱癌早期诊断的一些研究发现Tolle等在血液中和尿液中不同表达的miRNAs来发现膀胱癌，采用数据库来源于theSan ger database v 14 的基因芯片分析，在血液中，miRNA-2 6 b -5 p、miRNA-144-5 p、miRNA-3 7 4 - 5 p在浸润性膀胱癌中高表达，而且miRNA-26 b-5 p特异度为9 4% ，敏感度为65% 。

在尿液中miRNA-618 、miRNA-1 2 5 5 b -5 p在浸润性膀胱癌中高表达，而且miRNA- 1 2 5 5 b-5 p特异度为6 8% ，敏感度为85%。

由此推断，根据血液、尿液中一些特异的miRNAs来诊断浸润性膀胱癌成为一种可能[4]。

Zha ng等检测9 7例膀胱癌患者手术标本的癌组织和邻近正常组织miRNA-2 2 2表达水平，分析它们与临床病理参数和预后评估相关性。

结果显示肿瘤组织miRNA-2 2 2的表达水平显着高于相应的非癌组织(P < 0 .0 0 0 1 ) 。

Kaplan - Meier分析表明，具有较高miR- 2 2 2表达水平的患者与低表达水平患者相比较，5 年生存率分别为29.53%和5 2 .7 5 %。

其中包括miRNA- 2 2 2过表达，肿瘤病理分级，肿瘤分期和肿瘤数目的多变量Cox回归分析，miRNA 2 2 2的过表达与较差存活率独立相关(HR6 . 17 ，9 5% CI : 2 . 33 〜10 .39 ,P < 0 .001 ) 。

miRNA-222的过表达提示膀胱癌预后不良，并且可以被用来作为警示预后不良的生物标志物[5]。

Feng等利用Taqman探针茎—环法PCR精确测量10 0 对患者的膀胱癌组织、相邻的非肿瘤组织、膀胱癌患者和正常人对照的血浆miRNA19 a水平。

用miRNA19 a模拟和抑制剂转染膀胱癌细胞。

结果发现miRNA19 a在膀胱癌组织中显着上调，而且miRNA -19 a的表达水平与癌细胞的侵袭能力相对应。

同时，获得或丢失miRNA-19 a的功能性试验印证了它可能在膀胱癌的发展中起癌基因作用。

此外，膀胱癌患者的血浆中检出的miRNA-19 a支持发展为膀胱癌的潜在诊断标记物。

另一组研究者利用互补的反义核酸转染到原先上调的miRNAs发现其表达明显受到抑制，并检测出肿瘤细胞增殖明显减缓 [6]ll:miRNA 与膀胱癌的治疗Li 等研究发现，以顺铂为基础的化疗诱导了miRNA-3 4 a的启动子去甲基化，增加miRNA-3 4 a的表达，反过来增强了肌层侵入性膀胱癌细胞对顺铂的敏感性，降低了癌细胞侵袭性和增殖能力［8］。

Kozinn等根据miRNAs的变化来预测是否对吉西他滨有抵抗性，研究结果提示miRNA - 1 2 9 0 、miRNA-13 8 、miRNA- let -7 i、miRNA- let -7 b 通过调节黏蛋白4 ，使吉西他滨产生耐药性。

由此设想，通过调控的特定miRNAs的表达或者影响其上游基因信息传递通路，可以增强膀胱癌化疗的敏感性以及减少其耐药性］9］。

把表达p5 3基因的腺病毒载体和靶向于CDKN A基因的人工miRNA转染进入癌细胞可增加癌细胞对阿霉素的化疗敏感性；miRNA5 2 1的表达增加可通过靶向DNA修复酶位点增强肿瘤细胞在辐射中的敏感性［10］.为解决临床膀胱癌患者对顺铂耐药的问题，Drayton等研究发现SLC7 A11基因的表达与miRNA-2 7 a的表达呈负相关，当miRNA2 7 a高表达或者通过siRNA、柳氮磺胺吡啶降低SLC7 A11基因的活性时，耐药的膀胱癌细胞株的致敏性得以恢复，由此可推测miRNA-2 7 a 可作为治疗膀胱癌患者对顺铂耐药的一条途径［11］。

4:选取自己感兴趣的mi-RNA家族成员进行研究相关研究表明mi-RNA99a作为一个肿瘤抑制因子，在膀胱癌中水平降低，有降低尿路上皮癌侵袭性可能。

其他相关研究：mi-RNA在人类可以通过靶基因mTOF促进食管鳞状细胞的凋亡］12］，mi-RNA的低表达也能促进口腔鳞癌细胞的增殖］13］。

那么它的高表达是否意味着膀胱癌患者癌细胞同样受到抑制，提示着患者预后较好？或者依据miRNAs表达的[2] :梁敏，王海峰，王剑松。

《miRNAs在膀胱癌诊治中的研究进展》。

医学与哲学2015年6月第36卷第6B期总第527期。

[3]孙阳综述,郭剑明审校.《miRNA调控与膀胱癌的关系研究进展》。

International Journal of Urology and Nephmlogy 。

Jan 201 1 . V01. 31 NO. I[4]Tolle A , Ju ng M , Rabe nhorst S , et al . Ide ntificatio n of microRNAs in bloodand urine as tumour markers for the detect ion of urinary bladder can cer [ J] . On col Rep , 2013 , 30 (4) : 1949 —1956 .[5]Zha ng D Q , Zhou C K , Jia ng X W , et al . In creased expressio n of miRNA-222 is associated with poor prog no sis in bladder can cer [ J ] . World J Surg On col , 2014 , 12 : 241 .[6]张明，魏巍，刘禄成，等.反义微小RNA- 21对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响[J].吉林大学学报：医学版，2010 , 36 (3): 450 —452 .[7]张超，姚志勇，朱鸣阳，等.microRNA- 34a通过Notch 1对膀胱肿瘤细胞株T24 增殖的影响]J].解放军医学杂志，2012 , 37 (5) : 426 —430 .[8]Li H , Yu G , Shi R , et al . Cisplat in - in duced epige netic activatio n of miR -34 a sensitizes bladder cancer cells to chemotherapy [ J ] . Mol Cancer , 2014 , 13 (1) : 8 .[9]Kozi nn S I , Harty NJ , Delo ng J M,et al . MicroRNAProfile to Predict Gemictabi ne Resista nee in Bladder Carci noma Cell Li ne [ J ] . Ge nesCa ncer , 2013 , 4 (1 /2 ): 61 -69 . [10]Josson S , Sung S Y , Lao K , et al . Radiation modulation of microRNA in prostate cancer cell lines [J] . Prostate , 2008 , 68 (15) : 1599 —1606 .二、项目创新点、主要研究开发内容及目标（实施方案、技术关键、技术路线和技术经济指标等）实施方案：通过实验测量膀胱癌标本不同临床分期，病理分期mi-RNA含量，同时测量一定标本正常人群mi-RNA的含量，来推测膀胱尿路上皮癌各个发展阶段中的特定miRNA表达谱是否与膀胱癌恶性程度和临床分期存在着某些统计学上的联系。