将各实验组的小鼠进行拉颈脱臼处死后,解剖取出肝脏置于4℃生理盐水中,
然后用薄刀片切取大小约为10 mm×10 mm×2 mm的组织块,放入10%甲醛溶液
中固定48h以上。
然后按以下程序进行切片制作:
脱水
(于50%、70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水各1h,
放入95%、100%乙醇中各两次,每次40min)
透明
(先于95%酒精、二甲苯等量混合液20min,然后二
甲苯30min,须换一次二甲苯)
浸蜡
(先将各熔点石蜡进行融化,待凝固后再融化一次,以
便赶走气泡;再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ、石蜡Ⅲ透蜡各
40分钟)
包埋
(经过透蜡的组织用镊子夹出置于容器内,加入含蜂蜡
的石蜡Ⅲ,然后投入冷水中,使其立刻凝固成蜡块)
切片
(已固定和修好的蜡块粘于台木并固定在切片机夹物
台上,调节切片厚度为5 μm)
展片
(切好的蜡片置于40℃水浴锅中进行充分舒展)
粘片
(滴一滴赖氨酸于清洁的玻片中央,涂抹成均匀薄层,
然后插入水浴锅中捞片,使蜡片贴附于玻片上;一昼夜
干燥后待染)
脱蜡复水
(石蜡切片经二甲苯脱蜡两次各10min,然后放入100%、
95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液和蒸馏水中各
10min)
染色
(复水后的切片按试剂盒操作说明进行染色)封片
(滴一滴中性树胶于已染组织上进行封片)显微观察。