２ Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ的类型 根据电化学发光剂在免疫反应步骤中的作用部 位不同， Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ可分为底物电化学发光免疫反应和标 记物电化学发光免疫反应两种。前者的抗原抗体免 疫反应操作步骤与酶免疫测定基本相同， 仅在最后一 步将酶反应底物改为电化学发光剂来检测电化学发 光信号。常用的辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶的发 ， ２ 二氧杂 光底物分别为鲁米诺及其衍生物系列和 １ 环乙烷 磷 酸 酶 及 其 衍 生 物 系 列
［ １ ］ １ ９ ２ ９ 年电致化学发光现象由 Ｈ ａ ｒ ｖ ｅ ｙ 发现。２ ０
免疫反应系统和电化学发光系统。免疫反应系统主 要是抗原抗体结合形成免疫复合物， 而电化学发光 系统是利用电化学发光物质经氧化剂氧化形成激发 态中间体， 这种中间体不稳定， 在其返回基态时， 会 发射出光子， 其产率可以用发光信号检测仪接收测 ［ ４ ］ 检测 量 。以钌标记物电化学发光免疫分析为例， 中以标记有链霉亲和素直径几微米的磁珠作为固相 载体， 与生物素标记抗原或抗体结合后可以捕获检 测样本中的抗体或抗原， 再与反应体系中钌分子标 记的抗抗体或抗体结合， 形成的免疫复合体在外磁 场的作用下， 借助磁珠的磁力吸附完成固液相分离， 截留特异性抗原 抗体复合体， 洗涤除去多余或游离 的抗体或抗原。当反应体系中加入电子供体三丙胺 后， 在电场作用下， 钌分子和三丙胺在电极表面分别 被氧化成三价钌和带阳离子的自由基三丙胺。后者 很不稳定， 迅速失去一个质子形成强还原剂自由基 三丙胺， 将三价钌分子还原成激发态的二价钌， 其自 身则被氧化成二丙胺和丙醛。接着激发态的钌分子 ２ ０ｎ ｍ的 衰减成基态钌分子， 同时放出一个波长为 ６ ［ ３ ， ５ ］ 光子 。这一过程在电极表面以每毫秒几十万次 的速度循环进行， 产生的光子经光电倍增管检测光 强度， 从而测出待检抗体或抗原的含量。
［ ３ ］ Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ ） ， 它是一种在电极表面由电化学引发的特
异性化学发光反应， 比通过化合物简单混合启动的化 学发光反应更易精确控制。本文就近年来该方法的 研究进展及其在医学领域的应用作一综述。 １ Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ的基本原理 Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ是利用电化学发光剂标记的抗原或抗体 与待测物经过一系列的免疫反应和洗涤等理化步 骤， 最后用光学仪器测量免疫反应前后电化学发光 信号强度的改变， 从而对抗原或抗体物质进行定量 分析的一种方法。该方法主要包含了两个部分， 即
１ ２ ］ 断的 敏 感 性。 黄 琛 等［ 分别用蛋白质芯片法和
。这一类型
的Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ既避免了放射性核素的半衰期短及放射性 危害， 又克服了酶标记的不稳定性。它集电化学发 光、 生物素 亲和素、 磁微粒技术和免疫分析于一体， 是继放射免疫分析、 荧光免疫分析、 酶免疫分析和化 学发光免疫分析后的新一代免疫标记技术。同其他 免疫反应一样， 标记物电化学免疫分析反应也有直接 法、 双抗体夹心法和竞争法等 ３ 种主要方式。 ３ Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ的应用 ３ ． １ 细菌、 病毒及其毒素测定 与传 统 的 基 础 培 养 法 相 比， 用Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ检 测 肉 类、 家禽甚至饮用水中的细菌克服了速度慢、 检出率 低、 结果不准确的缺点。Ｙ ｕ 等
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ７ ６ ０ ／ ｃ ｍ ａ ． ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ ４ １ ２ ２ ． ２ ０ １ １ ． ０ ２ ． ０ ０ ５ 基金项目： 国家科技支撑计划（ ２ ０ ０ ８ Ｂ Ａ Ｉ ５ ６ Ｂ ０ ３ ） 作者单位： ２ ０ ０ ０ ２ ５上海， 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制 所， 卫生部寄生虫与病原生物学重点实验室， 世界卫生组织疟疾、 血 吸虫病和丝虫病合作中心
Ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｌ ｕ ｍｉ ｎ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙａ ｎ ｄｉ ｔ ｓ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｇ Ｕ ＯＪ ｉ ａ ｎ ，Ｃ Ｈ Ｅ ＮＪ ｉ ａ ｘ ｕ ． Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙｏ ｆ Ｐ ａ ｒ ａ ｓ ｉ ｔ ｅ ａ ｎ ｄＶ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｍ ｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙｏ ｆ Ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ，Ｗ Ｈ ＯＣ ｏ ｌ ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｇＣ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｍ ａ ｌ ａ ｒ ｉ ａ ，Ｓ ｃ ｈ ｉ ｓ ｔ ｏ ｓ ｏ ｍ ｉ ａ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ ，Ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｐ ａ ｒ ａ ｓ ｉ ｔ ｉ ｃ Ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄＰ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ，Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｆ ｉ ｌ ａ ｒ ｉ ａ ｓ ｉ ｓ ２ ０ ０ ０ ２ ５ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ：Ｃ Ｈ Ｅ ＮＪ ｉ ａ ｘ ｕ ，Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ：ｃ ｈ ｅ ｎ ｊ ｉ ａ ｘ ｕ １ ９ ６ ２ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍ Ｓ ｕ ｐ ｐ ｏ ｒ ｔ ｅ ｄｂ ｙＮ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｋ ｅ ｙＴ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙＲ＆ＤＰ ｒ ｏ ｇ ｒ ａ ｍ （ ２ ０ ０ ８ Ｂ Ａ Ｉ ５ ６ Ｂ ０ ３ ） Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ（ Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ ）ｉ ｓ ａｎ ｅ ｗｈ ｉ ｇ ｈ ｌ ｙｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｔ ｅ ｃ ｈ 【 ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙｉ ｎｗ ｈ ｉ ｃ ｈｎ ｏｒ ａ ｄ ｉ ｏ ｉ ｓ ｏ ｔ ｏ ｐ ｅ ｓ ａ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ．Ｉ ｔ ｈ ａ ｓ ｅ ｘ ｔ ｒ ｅ ｍ ｅ ｌ ｙ ｌ ｏ ｗｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｌ ｉ ｍ ｉ ｔ ａ ｎ ｄｗ ｉ ｄ ｅ ｄ ｙ ｎ ａ ｍ ｉ ｃ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ａ ｎ ｄａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ．Ｔ ｈ ｉ ｓ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅｈ ａ ｓ ｂ ｅ ｅ ｎｗ ｉ ｄ ｅ ｌ ｙ ｕ ｓ ｅ ｄｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｈ ｏ ｒ ｍ ｏ ｎ ｅ ｓ ，ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ ｍ ａ ｒ ｋ ｅ ｒ ｓ ａ ｎ ｄｃ ｙ ｔ ｏ ｋ ｉ ｎ ｅ ｓ ，ａ ｎ ｄｗ ｉ ｌ ｌ ｂ ｅ ａ ，ｆ ｏ ｏ ｄａ ｎ ｄｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ，ｅ ｔ ｃ ． ．Ｉ ｎｔ ｈ ｉ ｓｐ ａ ｐ ｅ ｒ ， ｎ ｏ ｖ ｅ ｌ ｍ ｏ ｄ ｅ ｒ ｎｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｔ ｉ ｃｔ ｏ ｏ ｌ ｉ ｎｔ ｈ ｅｆ ｉ ｅ ｌ ｄ ｓ ｏ ｆ ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ｔ ｈ ｅｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｆ Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａｗ ａ ｓ ｒ ｅ ｖ ｉ ｅ ｗ ｅ ｄ ． 【 Ｋ ｅ ｙｗ ｏ ｒ ｄ ｓ 】 Ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ；Ｂ ｉ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ；Ｔ ｒ ａ ｃ ｅｔ ｅ ｓ ｔ
［ ６ ］
ｇ 数量级。同时检测炭疽杆菌芽孢， 检出值为 于ｐ １ ０ ０个芽孢。在测定可溶性或颗粒抗原时， Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ 的灵敏度极高。 ３ ． ２ 肿瘤标志物测定 肿瘤标志物的检测对肿瘤早期诊断及判断预后、 转归、 评价疗效都具有重要意义。 应用 Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ对疑似 肿瘤患者进行肿瘤标志物检测， 既简便、 快速， 有利于 早期诊断， 又可免除介入检查的痛苦和高昂费用。 戴
世纪 ６ ０ 年代， 伴随电子技术的迅猛发展， 光电传感器 与化学发光技术也得到了推动和发展， 对电化学发光
２ ］ 现象的详细研究开始出现［ 。至 ２ ０世纪 ９ ０年代初，
电化学发光和免疫测定相结合形成了电化学发光免 疫分 析 方 法 （ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ，
［ ８ ］
Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ法检测６ ９ 例肿瘤患者和６ ５ 例正常对照组血清 中的糖类抗原１ ９ ９ （ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ， Ｃ Ａ １ ９ ９ ） 、 糖类抗原 ２ ４ ２ （ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ， Ｃ Ａ ２ ４ ２ ） 、 甲胎蛋白（ ａ ｌ ｐ ｈ ａ ｆ ｅ ｔ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ， Ａ Ｆ Ｐ ） 等１ ２ 项肿瘤标志物指标， 发现蛋白质芯片 Ｃ Ｌ Ｉ Ａ法简单、 方便， 而Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ法能更精确地检 法较 Ｅ
２ ＋ ３ ［ ７ ］
３ 项肿瘤标志物糖类抗原１ ５ ３ （ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ， Ｃ Ａ １ ５ ３ ） 、 糖类抗原１ ２ ５ （ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ， Ｃ Ａ １ ２ ５ ） 、 癌胚抗原 ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ｎ ｉ ｃａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ， Ｃ Ｅ Ａ ） 的含量进行检测， 结 （ 果显示３ 项指标联合检测的灵敏度和特异度分别为 ９ ０ ． ７ ６ ％ 和９ ６ ． ８ ３ ％， 优 于 单 项 检 测 时 的７ ７ ． ９ ４ ％和 ８ ９ ． ５ ７ ％、 ９ ５ ． ６ ３ ％和４ １ ． １ ７ ％、 ３ ８ ． ２ ３ ％和９ ３ ． ９ １ ％， 提示 用Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ联合检测能提高乳腺癌早期诊断和鉴别诊
１ １ ］ 庆福等［ 采用 Ｅ Ｃ Ｌ Ｉ Ａ对７ ８ 例乳腺癌患者血清中的