同源性分析标准操作规程
持有部门：检验科
制定部门：丰都县人民医院医院感染管理科执行时间： 2013年11月1日
一、同源性分析的应用
包括感染暴发的判断，感染病原菌的确定及感染源的寻找。

二、基本方法
1．细菌的表型特征分型技术(如血清型、耐药表型等)。

2．基因分型技术(如．PFGE、Rep—PCR、AFLP等)。

三、操作步骤
(一)表型分型(血清型、耐药表型)
1．标本孵育：从患者感染部位采集标本，并接种于相应培养基(培养瓶)中孵育。

2．分离菌种：分离病原菌(细菌或真菌)，并鉴定细菌(真菌)种类。

3．血清分型：如可能则对同种细菌进行血清分型，如军团菌等。

4．药敏试验：根据细菌(真菌)种类选择药敏卡(纸片)，进行药敏试验。

5．结果分析：分析血清型和药敏谱，如结果相同或药敏相差不大则提示有同源性。

(二)基因分型(PFGE)
1．菌栓制备：将细菌悬液与2％低熔点琼脂糖凝胶混合，制备菌栓。

2．细菌消化：分别用含溶菌酶和(或)蛋白酶K的裂解液对菌栓进行消化。

3．洗涤菌栓：可用无菌水反复清洗或PMSF中和多余的蛋白酶K。

4．酶切：按照各种不同限制性内切酶的说明进行酶切。

5．制胶：用PF(讵电泳凝胶模具制备：PF(逼级琼脂糖凝胶。

6．电泳：根据不同细菌酶切片段的大小选择适当的脉冲参数，进行电泳。

7．凝胶成像：胶块染色后在凝胶成像仪下成像。

8．结果分析：根据Tenover等制定的标准对凝胶图像进行分析，判断菌株之间的同源性。

四、注意事项
1．不同的分型方法，在分型能力、重复性、分辨能力、操作和成本等方面都不尽相同，可根据情况进行选择。

2．表型分型方法的分辨能力普遍比基因分型方法低，但简便、快速，适用于对感染暴发的初筛。

3．基因分型方法需要特殊实验器材，操作较繁琐且耗时，但为感染暴发同源性分析的“金标准”。

检验科要创作条件，开展该项业务。