• 接种物的准备和接种
• 孵育
• 结果判读
• 结果报告
二、微量肉汤稀释法
• 微量肉汤稀释法的含药微孔板（条）有多种现 成的商品试剂供应，并常与自动化仪器配套使
用。
三、琼脂稀释法
• 琼脂稀释法是将药物稀释于琼脂培养基中（其基础培 养肉汤同肉汤稀释法），一块平板为一个药物稀释度，
菌液点种于含药琼脂平板上，每点约1μl 菌液，菌液浓
稀释法
• 稀释法药敏试验（dilution method）是在体外定量检
测抗菌药物对细菌之抗菌活性的方法，它测定的是抗
菌药物的最小抑菌浓度（minimum inhibitory
concentration ,MIC），故稀释法药敏试验常简称为 “MIC测定”。
一、 常量肉汤稀释法
• 试验材料 • 抗菌药物溶液的制备、储存和稀释
抗菌药物 的敏感性试验
第一节 抗菌药物敏感性试验 的目的及试验指征
抗菌药物敏感性试验的定义
• 抗菌药物敏感性试验 （antimicrobial susceptibility test，AST） 简称药敏试验，是在体外测定抗菌药物抑制或 杀灭细菌的能力，亦即是测定细菌对抗菌药物 敏感性（或耐药性）的试验。
第四节 抗菌药物敏感性 试验的方法
纸片扩散法
• 原理 • 材料 ：培养基 、药敏纸片
• 试验菌液的制备
⑴ 直接菌落悬液法（direct colony suspension method）
⑵ 生长法（growth method）
纸片扩散法
• 接种 • 贴药敏纸片 • 孵育 • 结果判读 • 结果报告
度约为5×106 CFU/ml.。点种菌液处未见细菌生长即是 被药物所抑制。同样，抑制生长的最小药物浓度为 MIC。
浓度梯度纸条扩散法
• 浓度梯度纸条扩散法（gradient diffusion method）又称E 试验(E test)
• 优点：融合了纸不仅可用于一般细菌的MIC测定，对 于一些慢生长菌、厌氧菌和真菌的药敏也适用； • 缺点：成本较贵
抗菌药物敏感性试验的目的
• 测定细菌对抗菌药物的敏感性 • 地区性耐药监测 • 评价新药的抗菌药效 • 分析医院感染流行株的药敏谱
抗菌药物敏感性试验的指征
当某些致病菌或条件致病菌的药敏特点不能从其 种属特征上了解时，或其药敏结果易变时，这些菌的
临床分离株必须进行药敏试验。如：肠杆菌科的细菌、
革兰阴性葡萄糖非发酵菌、葡萄球菌属和肠球菌属的 细菌等.
药敏试验中抗菌药物的分组
• 通常将抗菌药的临床应用划分为一、二、三线 ：一线抗菌 药为常用的、价格较便宜的、已有一定使用时间的有效抗 菌药；三线抗菌药常为新开发的抗生素，效果较好，价格 通常亦较贵；一些效果好而副作用较大的抗菌药，通常也 不放在第一线。 • 美国临床和实验室标准化学会（Clinical and Laboratory
中介
• 一些抗菌药物敏感试验结果的表示方法还包括“中介”
（intermesiate，I），它包含几层不同的意思： (1)抗菌药对感染菌的MIC接近该药在血液和组织中的浓度，感
染菌的临床应答率可能低于敏感菌；
(2)结合药代动力学资料分析； (3)若某药在高剂量使用时是安全的（如β -内酰胺类药物），则 中介意味着高剂量给药可能奏效； (4) 中介的数据位置处于敏感与耐药之间，它可作为一个缓冲带
• 其它抗菌药物：①抑制蛋白质合成的抗菌药，
如氯霉素；②作用于细胞膜的脂肽类抗生素，
如多粘菌素B；③抑制RNA合成的药物，如利
福平；④抑制细胞壁合成的药物，如磷霉素。
药敏试验用药的选择依据和方法
• 致病菌的固有耐药特点 • 本地流行株的耐药谱和耐药趋势 • 药物的活性和毒性 • 药物的价格及其供应情况
Standards Institute ,CLSI；过去称作NCCLS）经常更新和发
布临床微生物实验室常规药敏试验的药物选择、分组和报 告指南，可供参考。
第三节 敏感、中介和耐药的概念
敏感
• 所谓敏感 (susceptible ， S) 是指当使用常规推荐 剂量的抗菌药物进行治疗时，该抗菌药在患者
第二节 药敏试验用药 的选择和分组
常用的抗菌药物
• β－内酰胺类 (1) 青霉素类
(2) 头孢烯类
(3) β－内酰胺类和β－内酰胺酶抑制剂的复方制剂
(4) 青霉烯类
(5) 单环类
常用的抗菌药物
• 糖肽类 • 氨基甙类 • 大环内酯类 • 四环素类
常用的抗菌药物
• 喹诺酮类
• 磺胺类和甲氧苄氨嘧啶
感染部位通常所能达到的浓度可抑制该感染菌
的生长。
耐药
• 所谓耐药(resistant，R)是指使用常规推荐剂量的抗菌 药物进行治疗时，该抗菌药在患者感染部位通常所能
达到的浓度不能抑制该感染菌的生长；或者该药对该
感染菌的临床疗效尚未在以往的治疗研究中被证实是 可靠的；或者抑菌圈直径落在特定细菌发挥耐药机制 （如β -内酰胺酶）的合适范围。
抗菌药物的联合药敏试验
• 纸片法联合药敏试验
纸片法联合药敏试验所用的培养基、药敏纸片、菌液 和培养条件等均和纸片法药敏试验相同。将所要试验 的两种药敏纸片邻近贴在涂菌的琼脂平板上，使两纸 片的中心距离恰好等于两药敏纸片单独试验时抑菌圈
的半径之和，按规定条件孵育之后观察抑菌圈的形状
改变，并据此判断两药联合药敏试验的结果