质粒DNA转化感受态大肠杆菌
一、实验原理
转化（transformation）是将一种生物（供体）的遗传物质（通常为DNA）转入另一种生物（受体）并使其在受体中得以保存和繁殖的过程。

大肠杆菌不是天然感受菌，在低温（0~5℃）环境下经CaCl2处理，细胞壁变松变软后能摄入外源DNA，这种状态称为感受态细胞（competent cell）。

质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。

二、实验材料准备
1. 器材
微量移液取样器，移液器吸头，恒温水浴锅，制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体LB-Amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，1.5 ml Eppendorf管，50 ml离心管，乳胶手套，恒温培养箱
2. 试剂
LB液体培养基、LB固体培养基、100mg/ml 氨苄青霉素(或卡拉霉素) 、感受态细胞
3. 材料处理
转化之前超净台紫外照射15-20min；
枪头、50ml离心管需提前灭菌，烘箱烘干；
液体LB培养基灭菌后放到冷库，防止长菌；
三、转化
1．从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液,置冰上解冻1-2 min。

2．加入质粒DNA溶液(含量不超过50ng,体积不超过10μl),轻轻摇匀,冰上放置30分钟。

3．42℃水浴中热击90秒, 然后迅速置冰上2min，整个过程不要振荡菌液。

4．向管中加入200μl LB液体培养基(不含抗生素),混匀后37℃振荡培养（225 rpm）1小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因。

5. 将上述菌液摇匀后涂布于含Amp（或kna）的LB琼脂平板上,正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后,37℃倒置培养12-16小时。

四、注意事项
1.加液体LB培养基之前观察其是否长菌
2.玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂
3.提前打开水浴锅，将温度调到42度
4.实验目的是表达蛋白，可热击完直接涂平板；目的是质粒扩增或后续要PCR，需在热击
后37℃振荡培养复苏1小时
5.实验室常用的用于质粒扩增的感受态菌是Top10，用于质粒表达的感受态菌是BL21 Star
(DE3)。