分子生物学实验考试操作试题
A 电泳
1、配制一块20ml的琼脂糖凝胶，做到加热一步。

2、请将制备好的琼脂糖溶液倒入制胶槽制胶。

3、请进行20ul电泳点样样品的准备；
4、请将20ul样品进行电泳点样；
5、请将10ul样品进行电泳点样。

B 提取质粒或RNA
1、请收集1-2ml菌体用于质粒提取；
2、请将溶液I 100ul加入离心管中，混匀。

3、请将溶液Ⅱ100ul加入离心管中，混匀。

4、请将溶液Ⅲ100ul加入离心管中，混匀。

5、请将氯仿抽提的质粒转移到新管中；
6、请将离心管中的质粒用乙醇沉淀。

7、请用乙醇溶液洗涤离心管中的质粒。

C PCR及酶切
1、请按照下面的要求加入所缺的灭菌水
灭菌蒸馏水
引物1 0.5ul
引物2 0.5ul
模板1ul
PCR mix 10ul
总体积20ul
2请将加好的PCR样品混匀做好放入PCR仪的准备。

3、请按照下面的要求加入所缺的缓冲液
内切酶EcoR I 0.5ul
内切酶Hind Ⅲ0.5ul
质粒5ul
10×M缓冲液
灭菌水12ul
总体积20ul
4、请按照下面的要求加入所缺的水
内切酶EcoR I 0.5ul
内切酶Hind Ⅲ0.5ul
质粒5ul
10×M缓冲液2ul
灭菌水
总体积20ul
5、请按照下面的要求加入所缺的酶EcoR I
内切酶EcoR I 0.5ul
内切酶HindⅢ0.5ul
质粒5ul
10×M缓冲液2ul
灭菌水12ul
总体积20ul
6、请按照下面的要求加入所缺的酶HindⅢ
内切酶EcoR I 0.5ul
内切酶HindⅢ0.5ul
质粒5ul
10×M缓冲液2ul
灭菌水12ul
总体积20ul
7、请将加好的酶切样品混匀做好放入水浴锅或保温箱的准备。

D 感受态制备和转化
1．请在超净台上取出1ml菌，放在灭菌离心管中。

2. 请在超净台上加入2ul质粒到感受态细胞中，并混匀。

3. 请在超净台上涂40ul菌液到固体培养基上。

4、请将涂布好的平板封口，放在培养箱中培养。

5、请在超净台上将氨苄青霉素贮液加到20ml左右的液体LB培养基中。