FITC蛋白标记方法
1.溶液准备:0.15mol/L NaCl溶液,配法,称取8.775gNaCl溶解于
1L水中,
0.15mol/L NaHCO3-Na2CO3,PH9.0缓冲液,配法,取(1.59%)Na2CO3
10ml,(1.26%)NaHCO3 90ml,调PH到9.0
2.蛋白溶解液:按V0.15mol/L NaCl:V0.15mol/L NaHCO3-Na2CO3=9:1,溶解蛋白,使蛋白的终浓度为10mg/ml。
3.加入荧光素,加入的荧光素的质量按m蛋白:m荧光素=50~80mg:1mg,称取完成后加入事先配好的蛋白溶解液中,于4℃生化培养箱中,摇床混匀过夜。
注意加入荧光素后需要避光。
4.将混匀后的溶液转移到Millpore超滤管中,超滤管中滤膜可以拦截分子量大于3KD的分子,配平后以5000g的转速于日立高速离心机(型号?)离心至无荧光素滤出为止。
大约需离3次,每次离心需2-3h。
5.离心结束后,将超滤管中的标记液倒入用锡箔纸包裹的塑料管中,不加叠氮钠于4℃保存。
参考文献:MMP-3 Contribute to Nigrostriatal Dopaminergic Neuronal Loss,BBB Damage, and Neuroinflammation in an MPTP Mouse Model of Parkinson’s Disease.。