图 1 人参皂苷 Re HPLC 色谱图 A 对照组; B 样品
2. 4 线性关系考察 精密称取人参皂苷 Re 对照 品 0 19、0 95、1 90、3 80、5 70 m g, 置 5 mL 容量瓶 中, 加 甲 醇 溶 解, 定 容, 即 得 浓 度 分 别 为 0 038、 0 190、0 380、0 76、1 14 mg /mL 的 系列 对照 品溶 液。吸取各对照品溶液 10 L, 注入液相色谱仪, 测 定。以峰面积积分值自然对数值 ( lnA ) 对对照品浓 度自然对数值 ( lnC )进行线性回归, 回归方程为 lnA = 1 53 lnC + 14 61, r= 0 999 3; 线性范围: 0 038~ 1 14 m g /mL; 检测限 ( S /N> 3) : 20 ng。 2. 5 精密度试验 吸取浓度为 0. 38 mg /mL 的人 参皂苷 Re 对照品溶液 10 L, 按上述色谱条件重复 进样 6次, RSD = 1. 12% , 表明仪器的精密度良好。 2. 6 稳定性试验 取批号 060801供试品溶液, 在 上述色谱条件下, 精密吸取供试品溶液 10 L, 每隔 2 h进样 1次, 共测定 6次, 峰面积的 RSD = 2. 56% , 表明样品在 12 h内稳定。 2. 7 重现性试验 准确称取批号 060801的样品, 共 5份, 按供试品制备方法处理。分别测定人参皂 苷 Re 的 含 量, 结 果 人 参 皂 苷 Re 平 均 含 量 为 17 78% , RSD = 3. 54% 。 2. 8 加样回收率试验 精密称取批号 060801样 品, 共 6份, 含量为 17. 80% , 分别加入人参皂苷 R e 对照品适量, 样品处理和测定同前, 结果见表 1。 2. 9 样品测定 分别准确称取多批人参茎叶总皂 苷样品, 每批 3份, 样品处理和测定同前, 精密吸取
RSD (% ) 5. 30
3 讨论
在流动相的选择过程中, 曾采用甲醇 水多个梯 度条件, 但均不能达到人参皂苷 R e与其保留时间 邻近干扰成分的完全分离, 选择乙腈 0. 5% 醋酸水 溶液梯度洗脱, 既能做到较好分离, 同时由于醋酸沸 点较低, 也不影响 ELSD 的检测。但在此条件下, 保 留时间过长, 可通过适当增加流速, 以达到缩短分析 时间的目的。
用 HPLC UV 法检测人参皂苷 类成分, 效果 并不理 想。 ELSD 检测器是一种通用型检测器, 可部分弥 补 UV法的缺点。本实验尝试采用 H PLC EL SD 方 法分析人参茎叶总皂苷中人参皂苷 Re 的含量, 取得 了满意的结果。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器 岛津 LC 20AD 高效液相色谱仪, 配有 四元 梯 度 泵, Sedex 75 型 ELSD 蒸 发 光 检 测 器; XWK 3A 无油空气压缩机。 1. 2 试剂 人参皂苷 R e对照品 ( 供含量测定用, 中国药品生物制品检定所 ) , 乙腈 ( 色谱纯, DIKMA 公司 ) , 水 ( 高纯水, 自制 ) , 甲醇 ( 分析纯, 中国医药 集团上海化学试剂公司 ) , 人参茎叶总皂苷 (吉林宏 久生物科技股份有限公司 )。
Joum a l o f Pharm aceutica l P ractice V o.l 27 2009 N o. 4
2. 2 供试品液的制备 准确称取人参茎叶总皂苷 12. 33 m g, 置 10 mL 容量瓶中, 以色谱纯甲醇溶解并 加至刻度, 0. 45 m 微孔滤膜滤过, 取续滤液, 备用。 2. 3 系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂 , 理论板数 按人参皂 苷 Re峰计算不 低于 5 000, 人参皂苷 Re 与相邻色谱峰分离度大于 1 5, 人参皂苷 Re 色谱峰拖尾因子在 0 95~ 1 05内。色 谱图见图 1。
AB STRACT Ob jec tive: T o determ ine quantitativ ely g insenoside R e in tota l g inseno side from stalk and leaf ofPanax ginseng, and to prov ide expe rim ental ev ident fo r tota l g insenoside quality contro l o fPanax ginseng. M ethods: The m e thod w as deve loped w ith the con d ition as follow s: D iam onsil C18 ( 4. 6 mm 25 mm, 5 m ) and D IKM A EasyGuard C18 ( 10 mm 4. 6 mm ) was used as chrom atograph ic column and guard co lum n respective ly. G rad ient e lution was emp loyed w ith the m obile phase of aceton itrile 0. 5% acetic acid/wa ter at a flow ra te of 1 25 mL /m in. ELSD: tem perature o f the drift tube 40 ; gas pressure: 3 4 bar; ga in: 7. R esu lts: The standard curv e: C = 1 191 10- 7A - 0 187 6; the linear range: 0 038~ 1 14 m g /mL, r= 0 999 3; the lim its of detection: 20 ng ( S /N > 3); recovery rate o f the added samp le: 96. 84% ~ 104. 21% . Con clusion: W ith its accuracy, sens itiv ity, reproduc ib ility as w ell as the sim p licity o f samp le preparation, th is m ethod is feasib le for quality contro l of tota l g insenoside from stalk and leaf o fPanax ginseng. K EY W ORDS P anax g inseng; tota l g insenoside; g insenoside R e; H PLC ELSD
基金项目: 总后 十一五 专项项目 ( N o. 06Z024) , 十一五 军队中医 药研发推广专项课题 ( N o. 2006172002) 作 者 简 介: 何 厚 罗 ( 1987 ) , 男, 第 二 军 医 大 学 本 科 学 员. Te:l 15900414117, E m ai:l hh lqw l1@ 163. com 通讯作者: 辛海量 E m ai:l h ailiangxin@ 163. com
摘要 目的: 分析人参茎叶总皂苷中人参皂苷 Re 的含量, 为人参总皂苷的质量控制提供依据。方法: 色谱
柱: D iam onsil C18 ( 4. 6 mm 25 mm, 5 m ), 保护柱: D IKMA EasyG uard C18 ( 10 mm 4. 6 mm ), 流动相: 乙腈
0. 5% 冰醋酸水溶液, 梯度洗脱, 流速: 1. 25 mL /m in; ELSD: 漂移管温度 40 , 载气压力 3. 5 bar, 放大系数为
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2 方法与结果
2. 1 色 谱条 件 色 谱柱: D IKMA D iam onsil C18 ( 4 6 mm 25 mm, 5 m ), 保 护柱: DIKMA E asy G uard C18 ( 10 mm 4. 6 mm ); 流动相: 乙腈 0. 5% 冰 醋酸水溶液; 梯度洗脱: 0~ 45 m in: 乙腈从 18% 梯度 变化至 23% ; 流速: 1. 25 mL /m in; ELSD: 漂移管温度 40 , 载气压力 3. 5 bar, 放大系数为 7。
人参 Panax ginseng C. A. M ey. 是五加科植物, 其多种提取物均被广 泛应用 [ 1] 。人 参茎叶总皂苷 系从人参茎叶 中提取获 得, 具 有抗休克 [ 2~ 6] 、抗衰 老 [ 7] 等多方面的药理 作用 [ 8] 。人参 茎叶总皂苷富 含多种人参皂 苷类成分, 其中人 参皂苷 R e 含量较 高, 可用于对其进行质量控制。由于人参皂苷类成 分中的呈色基团不活泼, 紫外吸收较差, 仅限于短波 长处的吸收可用于检测。但是在检测工作中, 末端 吸收易受试剂影 响, 存在 背景干扰, 采用梯度洗脱 法, 基线漂移严重, 给分析工作带来困难。因此, 应
HE H ou luo1, HUANG Zhang bei1, SHENG Jia yu1, YU E X iao qiang1, L I M in2, X IN H a i liang1, 3 ( 1 D epartment of T rad itional Chinese
M ed ic ine, Second M ilita ry M ed ica lU niversity, Shangha i 200433, China; 2 D epartm ent ofM ilitary H ea lth, N ava lF acu lty, SecondM il itary M edical U niversity, Shangha i 200433, China; 3 546th H ospita l of PLA, U rum qi 841700, China)
总皂苷中人参皂苷 R e 的含量分析方法。
关键词 总皂苷; 人参皂苷 Re; H PLC ELSD
中图分类号: R917
文献标识码: A
文章编号: 1006- 0111( 2009) 04- 0291- 03