【doc】醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期)醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究霾萑彝皇蜃中医医院(8300o0)赵翡翠赵晓琴李永和摘要目的:考察不同醋制方法对延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用所产生的影响.方法:采用HPLC法测定延胡索醋制品中延胡索乙素的含量,采用小鼠扭体法和热板法对比各醋制品镇痛作用.结果:醋制延胡索中延胡索乙素的含量高于生品,其中以醋烘品为最高;醋制延胡索的镇痛作用强于生品,:采用其中以醋烘品为优.结论醋烘法进行延胡索加工炮制可控,可行,有效,为延胡索加工炮制的规范化提供了新的可以借鉴的方法.关键词醋制廷胡索;延胡索乙素;镇痛;炮制延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索(CorydalisyanhusuoW.T.Wang)的干燥块茎,味辛,微苦,性温.归肝脾经,功能行气血,调月经,止疼痛,用治气血瘀滞诸痛证.延胡索有多种炮制方法,如醋炒,醋煮,醋蒸,酒炒,盐炒等.醋,味酸,苦,性温,具有散瘀止血,理气止痛作用,中医认为,醋能引药人肝,增强药物疏肝散瘀,止痛的功效,醋制能加强延胡索疏肝止痛的作用.现代研究表明延胡索主要含生物碱类成份,其中延胡索总生物碱,延胡索甲素,乙素,丑素均有镇痛作用,尤以延胡索乙素镇痛作用最强【1】.但延胡索乙素为叔胺型,亲脂型生物碱,游离时难溶于水,经醋制后,其生物碱与醋酸结合成易溶于水的醋酸盐,煎煮时易于溶出,从而更好地发挥药效,故临床上多以延胡索醋制品人药. 现延胡索多用醋炒,醋煮两种炮制方法,但工艺中不易于控制炮制温度和药材含水量,也不便于规范饮片炮制质量,尽管有关延胡索的炮制条件和含量变化的探讨,文献报道较多,但如何规范炮制 4讨论4.1国内糖尿病研究有应用STZ一次性剂量 5065mg/kg,数天后可产生持续性高血糖,但与糖尿病实际发病有一定差距[51.本实验用高脂饮食结合小剂量STZ注射的方法复制出糖尿病动物模型, 该模型具有中度高血糖,高血脂的特点,其发病过程及特征与2型糖尿病患者的代谢特点和临床过程比较相似,且造模方法简便易行,成功率高,重复性好,是研究2型糖尿病发病机制,相关并发症及药物学评价的理想模型.4.2本实验中,三黄消渴片低,高剂量组均能明显降低糖尿病大鼠血糖,而且随用药时间的延长,降糖作用增强.低剂量组降糖效果优于高剂量组,表明其降糖作用没有剂量依赖性.这些结果为我~f31t$ 床运用三黄消渴片治疗糖尿病提供了实验依据,至于其降糖作用的机制则有待进一步研究. 4.3在整个观察过程中,模型空白对照组出现典型的多饮,多食,多尿和明显消瘦,毛竖无光泽,跄卧拱背.阳性药物对照组也有类似改变,但程度较模型组轻.给药20天后服用三黄消渴片低,高剂量组大鼠的毛发,体重,精神状况,血糖值比阳性对照药物组和模型空白对照组相比均有明显改善. 4.4三黄消渴片低剂最组大鼠在喂药30天内全部存活,存活率100%.三黄消渴片高剂量组大鼠有3只死亡,存活率57.1%.模型空白对照组有4只死亡,存活率20%.阳性对照药物有4只死亡,存活率20%. 本研究结果表明,三黄消渴片具有一定的中医理论基础,且低剂量组在降低糖尿病高脂血症大鼠血糖的同时,对其消渴症状,体质,精神状态均有明显改善.表明三黄消渴片疗效肯定,可作为临床糖尿病治疗的辅助用药,充分发挥中医药标本兼治, 扶正祛邪的优势.】【1【2】【3】【4]【5】参考文献:E海科学技术出版社,1989:.83-102 苗述楷,蔡惠文.糖尿病并发症防治学【M】.北京:中国医药科技出版社,2000.陈奇.中药药理研究方法学【M].人民卫生出版社,1993. 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学【M】.人民卫生出版社,1982.粱海荣,唐焕文,罗皓,链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾病模型的建立.应用预防医学,2006,12(3):133-135. (收稿日期:2007-03—14)新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期)35 方法,改善目前各种市售的炮制品质量差异大的状况,还有待进一步验证.而据文献报道【21醋烘法具有易控制烘制温度和药材含水量,操作简单易行, 便于规范炮制品质量等优点,故本实验参照《中国药典》一部2005版延胡索药材项下测定醋烘法与醋炒法和醋煮法中延胡索乙素的含量,并进行小鼠镇痛作用的对比,对采用醋烘法炮制延胡索进行初步探索,以便为今后规范醋延胡索的炮制工艺和质量标准奠定基础.l仪器与试药Waters2695高效液相色谱仪(美国waters公QTM5超纯水仪(MilliporeCorporation, 司);Direct—Bedford,MA,U.S.A.);延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110726—200409),延胡索药材(新疆参茸药业有限公司,批号20060101),小白鼠:昆明种,体重l8—22g,由新疆医科大学动物中心提供(动物合格证号:医动字16—001).所用试剂均为分析纯.2方法与结果2.1延胡索炮制品的制延胡索生品:取延胡索药材捣碎成粗颗粒状, 颗粒度为过一号筛.醋炒延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋拌匀,闷润至醋被吸尽后,置炒制容器内,用文火加热炒干,取出放凉.醋煮延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋与适量清水(以平药面为宜),置煮制容器内,用文火加热煮至透心.醋液被吸尽时,取出晾干. 醋烘延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋拌匀,至醋吸尽后,置烘箱中于8O?烘干,取出放凉. 2.2各炮制品中延胡索乙素含量测定2.2.1色谱条件色谱柱:4.6mmxl50mmVP—ODS C.柱,粒度5lxm;流动相:甲醇一O.1%磷酸(用三乙胺调pH至6.0)(55:45),流速:1.0ml?min;检测波长:280nm;柱温:35?,进样量:lOIxL. 2.2.2对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量,加甲醇制成每lmL含461xg的溶液,作为对照品溶液.2.2.3供试品溶液制备取延胡索各炮制品粉末 (过三号筛)lg,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入浓氨试液一甲醇(1:20)50mL,称定重量,冷浸lh后加热回流lh,放冷,再称定重量,用浓氨试液一甲醇(1: 20)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25mL,蒸干,残渣加甲醇溶解,定量转移至5mL容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,即得. 2.2.4线性关系的考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液5,lO,l5,2O,25,30lxL在上述色谱条件下重复进样3次,测定峰面积,以峰面积平均值和浓度进行线性回归,得线性方程为:Y=998.03X+248.8,r=0.9997.延胡索乙素在0.234—1.403lxg之间具有良好的线性关系.2.2.5各炮制品中延胡索乙素的含量测定精密吸取各炮制品的供试品溶液201xL注入色谱柱,按外标峰面积法计算延胡索乙素的含量,结果见表1. 表1延胡索乙素含量测定结果2.3小鼠镇痛实验2.3.1样品液的制备嘲称取延胡索生品及炮制品各25g,分别置于1000mL烧杯中,用400mL和,每次保持微沸20min,用脱 250mL水分别煎煮2次脂棉过滤,合并滤液,浓缩至100mL,备用. 2.3.2扭体法圈取体重18~22g小鼠(雌雄各半)l00 只,随机分成5组,分别灌胃给予生理盐水及上述样品液,每只0.6mL,剂量分别为7.5g生药每kg体重.40min后,各鼠腹腔注射O.7%醋酸0.2mL,观察并记录15min内各鼠产生扭体反应(小鼠腹部受化学刺激后出现伸展后肢,腹部收缩,扭曲身体;腹部内凹呈蜂腰状,躯干与后肢伸张,臀部高起)的次数,由表 2可见,各样品组与生理盐水组比较小鼠扭体次数差异均有统计学意义(JP.O1),醋品镇痛作用均强于生品(JP.O1),其中以醋烘延胡索作用为强. 表2延胡索小鼠的镇痛作用(扭体法)与生理盐水组比较,?P<O.Ol;与生品组比较,AP<O.O12.3.3热板法昀取体重18~22g小鼠(雌性),调节恒温水浴水温在(55~0.5)?,将500mL烧杯放入其36新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期) 与给药前比较,'O.01;与生理盐水组比较,AP>0.05,AP<0.01;与生品组比较,?O.01中,使烧杯底部接触水面.小白鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时,就发生舔后足的特殊反应.从接触热板到舔后足所需要的时间作为痛阈值,以此为观察指标.每次取雌性小白鼠1只,放人烧杯内.记录自放人烧杯至出现舔后足所需时间(S),作为该鼠的痛阈值.凡30s内不出现舔后足者,弃之不用.依次测量各小鼠的痛阈值.取预选合格的小鼠100 只,随机分为5组,每组20只,重新测痛阈值1次. 将两次痛阈的平均值作为该鼠给药前的痛阈值.各鼠分别灌胃给予生理盐水及上述样品液,每只 0.6mL,剂量分别为7.5g生药每kg体重,给药后的 30,60min测定各鼠痛域值.若小白鼠在热板上 60min无痛觉反应,应即取出,按60min结果计人表内,计算用药后痛域提高的百分率(结果见表3),可见各样品组镇痛作用均强于给药前和生理盐水组,醋品镇痛作用均强于生品(P<O.01),其中以醋烘法作用为强.痛阈提高百分率=(用药后平均痛阈值一用药前平均痛阈值)佣药前平均痛阈值X 1oo%3讨论中药饮片是在中医药理论指导下,根据辨证用药及调剂,制剂的需要,对中药材进行加工炮制的成品.炮制工艺包含着深厚的中医药理论与丰富的经验技艺,是中医药的特色,也是具有民族特色的独特制药技术,必须继承其中的精髓,勇于创新,使其应用科学化,规范化,正是基于此,本实验对比延胡索生品及其不同醋制品中延胡索乙素的含量变化,并进行了小鼠镇痛实验,结果表明:延胡索经醋炒,醋煮,醋烘后均能提高延胡索乙素的含量,从而证明了醋品的止痛作用增强的原因,同时醋烘品相对于醋炒品,醋煮品延胡索乙素含量稍高,可能是烘制温度较低,对延胡索乙素破坏较少的原因【7】. 扭体法和热板法两种镇痛实验表明,延胡索具有镇痛作用(P<O.01),且醋制延胡索的镇痛作用明显优于延胡索生品(P<O.01),醋烘法优于醋炒法和醋煮法,可得出采用醋烘法进行延胡索加工炮制从操作工艺上是可以控制的,从有效成份含量的测定来看是可行的,从药理实验结果来看是有效的,从而为延胡索加工炮制的规范化提供了新的可以借鉴的方法.参考文献[1]沙世炎,徐礼桑,严敏如,等.中草药有效成份分析法(上册).北京:人民卫生出版社,1985:53.[2]窦志英,孙巍.不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响.天津中医药大学,2006,25(3):186-187. [3]张化,张学兰.延胡索炮制现代研究.山东中医药大学,2001,25(2):l43一l44.[4]龚千峰.中药炮制学[M】.北京:中国中医药出版社,2003:201. [5]杨中林.中药炮制学实验与指导【M】.北京:中国中医药出版社, 20o3:84.[6]苗明三.实验动物和动物实验技术【M】.北京:中国中医药出版社.1997:130-145,187—190.[7]马民.元胡炮制的现代研究.时珍国医国药,2005,16(5):709. (收稿日期:2006-11-28)。