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微生物学证据-确诊
镜检： 无菌病灶处、病理切片
培养： 以下任一无菌病灶处培养阳性：CSF、组织、无菌病 灶引流液、血 （BALF、颅窦标本、尿中培养出真菌不能确诊）
抗原检测： 隐球菌抗原
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实验室诊断方法
直接镜检+组织病理 真菌培养+鉴定 血清学 分子生物学
涂片染为革兰阳性 六胺银染色 墨汁染色
G试验：小结
泛真菌marker，无法获知是哪种真菌 高NPV，连续≥2次G试验阳性可提高特异性和
PPV，2次/周进行监测 IFI早期诊断 假阳性高 念珠菌定植不引起G试验升高 动态反应感染程度和抗真菌治疗疗效 抗真菌药物治疗不影响其敏感性
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GM试验
诊断：侵袭性曲霉感染（IA） 检测底物：半乳甘露聚糖
12
真菌培养-不同接种方法
隐球菌培养
培养基：SDA、脑心浸液琼脂 （血平皿、巧克力平皿也生长）
孵育温度：25-30度 鉴定方法：生化鉴定，质谱鉴定，基因测序
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抗真菌药物抗菌谱
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抗原检测
IFIs血清学检测方法
真菌
真菌（除外接合 菌和新型隐球菌）
曲霉
抗原、抗体、酶、代谢产物 (1,3)-β-D-葡聚糖
(Exophiala) dermatitisdis
EORTC/MSG 2008
GM试验阳性—Probable invasive fungal disease 血清、血浆、BAL、CSF
De Pauw B., et al., CID, 2008, 46:1813-21
GM试验假阳性
β-内酰胺类抗菌药物：哌拉西林-三唑巴坦 免疫球蛋白、血液制品 高剂量使用激素 透析：不能清除大分子GM 化疗的严重黏膜炎的患者
真菌镜检
真菌镜检
W7612 CSF 墨汁染色， 隐球菌
W7612 CSF 革兰染色， 隐球菌
真菌镜检
某些真菌病可通过显微镜直接检查确诊 如：卡氏肺孢子菌孢囊的检测
错误的阳性结果也会出现： 如：墨汁染色中溶解的淋巴细胞错误认 为新型隐球菌 脂肪滴容易与出芽酵母细胞混淆
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真菌培养
真菌培养
不同菌量的隐脑病人中的G试验敏感性
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Rhein et al., OFID, 2014, 1-7
CSF中BDG水平随抗真菌治疗快速下降
抗真菌治疗
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隐脑(-) 隐脑(+)
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脑脊液BDG水平与病死率相关
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G试验：至少连续2次检测
283名血液病患者，30名AML、MDS念珠菌血症患者，30名健康志 愿者
sensitivity 97%，specificity 93% 连续≥2次G阳性，可提高特异性、PPV 确诊或拟诊IFI，平均比出现临床症状和体征早10d；阳性患者中
70%比临床表现早3天
Odabasi Z , et a2l.1Clin Infect Dis, 2004, 39: 199-205
半乳甘露聚糖（GM）
新型隐球菌 念珠菌 念珠菌 念珠菌
念珠菌 曲霉、隐球菌 组织胞浆菌
荚膜多糖抗原 甘露聚糖、甘露聚糖抗体
烯醇酶 烯醇酶抗体、其它胞浆内抗原的
抗体 D-阿拉伯糖醇
甘露醇 抗原
标本类型 血清、血浆
血清、BAL （CSF?） 血清、CSF 血清、CSF
血清 血清
血清 血清 血清、尿
b1,3 b1,6 glucans
隐球菌的实验室检测
杨启文 北京协和医院
IFD的诊断和治疗
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微生物学证据-临床诊断
镜检： 以下任一病灶处查见丝状菌：痰、肺泡灌洗液、支气 管毛刷、窦道析出物
培养： 以下任一病灶处查见丝状菌：肺泡灌洗液、支气管毛 刷、窦道析出物
抗原检测： G试验（血浆、血清） GM试验（血浆、血清、BALF、CSF）
PPL bilayer
b1,3 glucan synthase
G试验
mannoproteins (1,3)-β-D-葡聚糖 (BG)
真菌细胞壁成分 >50%
chitin ergosterol
广泛存在于各种 真菌，除外接合 菌
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G试验检测范围
检测底物： (1,3)-β-D –葡聚糖（BDG） 诊断：侵袭性真菌感染（IFI） 检测频率：2次/周 真菌细胞壁成分：念珠菌，曲霉，镰刀
谷类食物中的GM抗原通过肠道入血
儿童和新生儿：假阳性83%
母乳或配方食品中双歧杆菌与GM有交叉反应
G试验在隐球菌脑膜炎中有无诊断价值？
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G试验诊断隐脑的性能评价
隐脑病人中脑脊液BDG浓度为343（200-597） pg/ml，非隐脑病人中 为37（23-46）pg/ml。
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G试验假阳性影响因素—方法学缺陷
血液透析患者（纤维素膜） 细菌血症、肝硬化、小肠结肠炎 患者使用凝血因子、白蛋白、免疫球蛋白 IV抗生素（β-内酰胺类：AMC/SAM…） • 抗肿瘤准备：蘑菇多糖、裂褶菌多糖 • 手术中使用棉纱垫、棉拭子等 标本溶血、脂血、黄疸 标本污染（床边消毒纱布，实验室环境粉尘） 实验耗材：所有枪头、试管、玻璃管均应无热原
菌，毛孢子菌，卡氏肺孢子菌，支顶孢 属，酵母菌属 不能检测：接合菌（毛霉、根霉）
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EORTC/MSG 2008
G试验阳性—Probable invasive fungal disease 除外隐球菌病和接合菌病（毛霉、根霉
、犁头霉）
De Pauw B., et al., CID, 2008, 46:1813-21
曲霉细胞壁成分 菌丝在组织中生长时释放 热稳定 可溶性： serum, BAL, CSF 检测频率：2次/周 交叉反应：马内菲青霉（多种青霉、拟青霉）、深红酵母 、新型隐球菌 、头地霉 、顶孢霉、链格孢 、郁金香葡萄孢 、枝状枝孢霉 、多主枝孢霉 、尖镰孢 、宛氏拟青霉、产黄
青霉、指状青霉、红色发癣菌 、Wallemia sebi、Wangiella