优点和缺点：减少了人 initiative (EAPCRI)
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不同菌量的隐脑病人中的G试验敏感性
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CSF中BDG水平随抗真菌治疗快速下降
抗真菌治疗
隐脑(-)
隐脑(+)
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KOH 10-20%：皮肤标本/痰 革兰染色：多染为革兰阳性 六胺银染色 墨汁染色

真菌镜检
真菌镜检
W7612 CSF 墨汁染色， 隐球菌
W7612 CSF 革兰染色， 隐球菌
真菌镜检
某些真菌病可通过显微镜直接检查确诊 如：卡氏肺孢子菌孢囊的检测


错误的阳性结果也会出现： 如：墨汁染色中溶解的淋巴细胞错误认 为新型隐球菌 脂肪滴容易与出芽酵母细胞混淆
[1]. Burgener-Kairuz P, et al. J Clin Microbiol, 1994, 32:1902–7. [2]. Kermekchiev MB, et al. Nucleic Acids Res, 2009, 37:e40. [3]. Bernal-Martinez Let al. J Clin Microbiol, 2011, 49:3596–9.
EORTC/MSG 2008

GM试验阳性—Probable invasive fungal disease 血清、血浆、BAL、CSF
De Pauw B., et al., CID, 2008, 46:1813-21
GM试验假阳性




β-内酰胺类抗菌药物：哌拉西林-三唑巴坦 免疫球蛋白、血液制品 高剂量使用激素 透析：不能清除大分子GM 化疗的严重黏膜炎的患者

谷类食物中的GM抗原通过肠道入血 母乳或配方食品中双歧杆菌与GM有交叉反应
儿童和新生儿：假阳性83%
交叉反应真菌：青霉、拟青霉、隐球菌、头状地 霉、组织胞浆菌等
31
GM试验假阴性
抗真菌药物
三唑类－降低GM水平，尤其是预防性使用
伊曲康唑
低侵袭性曲霉病 低曲霉负荷量
32
隐球菌GM试验阳性
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分子检测

分子检测目前尚未纳入侵袭性真菌感染的EORTC/MSG 原因：方法学未标准化

商业化的分子检测产品可以提供标准化的方法和试剂，从而 加速分子检测的验证过程
真菌病分子诊断的商业系统
检测名称 Yeast Traffic Light MycAssay Aspergillus Viracor 生产商 美国AdvanDx公司 英国Myconostica/LAB21 Viracor.IBT实验室 检测方法 PNA-FISH RT-PCR RT-PCR 多重PCR + 微 珠流式细胞术 检测靶点 26S rRNA (念珠菌属) 18S rRNA (15种曲霉 菌) 18S rRNA+ITS1 曲霉 菌属、ITS1 念珠菌属 23种真菌 标本类型 阳性血培养液 肺泡灌洗液、血 清 肺泡灌洗液、血 清、血浆 呼吸道标本、阳 性血培养液
肺泡灌洗液、 全血
6种真菌（5种念珠菌 全血 和烟曲霉） 多重PCR+溶解 5种念珠菌 阳性血培养液 曲线分析
T2 Candida (FDA cleared)
T2 Biosystems
微珠和T2磁力 检测平台
5种念珠菌
全血
核酸提取

标本
类型（全血，血清，血浆，冰冻组织，福尔马林固定石蜡包埋组织） 染色（组织学染色）
脑脊液BDG水平与病死率相关
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G试验假阳性影响因素—方法学缺陷

• •

血液透析患者（纤维素膜） 细菌血症、肝硬化、小肠结肠炎 患者使用凝血因子、白蛋白、免疫球蛋白 IV抗生素（β-内酰胺类：AMC/SAM…） 抗肿瘤准备：蘑菇多糖、裂褶菌多糖 手术中使用棉纱垫、棉拭子等 标本溶血、脂血、黄疸 标本污染（床边消毒纱布，实验室环境粉尘） 实验耗材：所有枪头、试管、玻璃管均应无热原
21 Odabasi Z , et al. Clin Infect Dis, 2004, 39: 199-205
G试验在隐球菌脑膜炎中有无诊断价值？
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G试验诊断隐脑的性能评价

隐脑病人中脑脊液BDG浓度为343（200-597） pg/ml，非隐脑病人中 为37（23-46）pg/ml。
基于核酸扩增的侵袭性真菌检测方法
真菌类型 曲霉菌 念珠菌 肺孢子菌 侵袭性真菌 标本 肺泡灌洗液、血 血 肺泡灌洗液、肺组织、 痰 血、组织 PCR靶基因 18S rRNA、28S rRNA、 ITS1 ITS2、18S rRNA ITS、LSU mt、MSG 18S rRNA、ITS 敏感度（%） 特异度（%） 55～100 77～100 40～100 75～100 64～100 66～100 59～100 70～98
隐球菌的实验室检测
杨启文 北京协和医院
IFD的诊断和治疗
2
微生物学证据-临床诊断



镜检： 以下任一病灶处查见丝状菌：痰、肺泡灌洗液、支气 管毛刷、窦道析出物 培养： 以下任一病灶处查见丝状菌：肺泡灌洗液、支气管毛 刷、窦道析出物 抗原检测： G试验（血浆、血清） GM试验（血浆、血清、BALF、CSF）
Luminex xTAG ASRs 美国Luminex公司
Fungal Assay
SeptiFast FilmArray blood panel (FDA cleared)
IBIS/Abbott Molecular
Roche Biofire
多重PCR+电喷 雾电离质谱
多重PCR
rRNA大亚单位; ~200 种真菌
G试验：小结
泛真菌marker，无法获知是哪种真菌 高NPV，连续≥2次G试验阳性可提高特异性和 PPV，2次/周进行监测 IFI早期诊断 假阳性高 念珠菌定植不引起G试验升高 动态反应感染程度和抗真菌治疗疗效 抗真菌药物治疗不影响其敏感性

28
GM试验



诊断：侵袭性曲霉感染（IA） 检测底物：半乳甘露聚糖 曲霉细胞壁成分 菌丝在组织中生长时释放 热稳定 可溶性： serum, BAL, CSF 检测频率：2次/周 交叉反应：马内菲青霉（多种青霉、拟青霉）、深红酵母 、新型隐球菌 、头地霉 、顶孢霉、链格孢 、郁金香葡萄孢 、枝状枝孢霉 、多主枝孢霉 、尖镰孢 、宛氏拟青霉、产黄 青霉、指状青霉、红色发癣菌 、Wallemia sebi、Wangiella (Exophiala) dermatitisdis
38
隐球菌：无症状筛查



抗原血症患者随着病 程进展逐渐表现出临 床症状 CrAg阳性后平均22天 出现隐球菌脑炎症状 （5-234天） 这此期间治疗能显著 降低死亡率
Expert Opin Med Diagn. 2012; 6(3): 245-51. AIDS 2002, 16: 1031-38
组织胞浆菌
抗原
血清、尿
G试验
mannoproteins
b1,3
b1,6 glucans PPL bilayer
b1,3 glucan synthase
chitin ergosterol
(1,3)-β-D-葡聚糖 (BG) 真菌细胞壁成分 >50% 广泛存在于各种 真菌，除外接合 菌

18
G试验检测范围
36

G+GM
种属 念珠菌属 镰刀菌属 隐球菌属 曲霉菌属 青霉/拟青霉 接合菌纲 G
＋ ＋ －/+ ＋ ＋ －
GM
－ － ＋ ＋ ＋ －
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隐球菌荚膜多糖抗原检测
标本：血、CSF
乳胶凝集（LA）、ELISA、免疫层析 LA假阳性：低于1%。多为类风湿因子、系
统性红斑狼疮、毛孢子菌感染（抗酸杆菌个 例报道） LA假阴性：疾病早期 敏感性：93-100% 特异性：93-98%
除外隐球菌病和接合菌病（毛霉、根霉
、犁头霉）
De Pauw B., et al., CID, 2008, 46:1813-21
G试验：至少连续2次检测


283名血液病患者，30名AML、MDS念珠菌血症患者，30名健康志 愿者 sensitivity 97%，specificity 93% 连续≥2次G阳性，可提高特异性、PPV 确诊或拟诊IFI，平均比出现临床症状和体征早10d；阳性患者中 70%比临床表现早3天
检测底物： (1,3)-β-D –葡聚糖（BDG）
诊断：侵袭性真菌感染（IFI）
检测频率：2次/周
真菌细胞壁成分：念珠菌，曲霉，镰刀
菌，毛孢子菌，卡氏肺孢子菌，支顶孢 属，酵母菌属 不能检测：接合菌（毛霉、根霉）
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EORTC/MSG 2008
G试验阳性—Probable invasive fungal disease
CrAg试剂盒
IMMY-LA
• LFA
ELISA
分子生物学检测
分子检测(核酸)

非扩增的核酸检测技术
PNA FISH (Yeast Traffic light, AdvanDx)

核酸扩增检测技术(NAAT)