***含量测定方法学确认方案日期：2016年1月验证方案审查与批准您下面的签字表明您已审阅此份验证方案并同意实施。

目录1. 目的....................................................... 错误!未定义书签。

2. 范围....................................................... 错误!未定义书签。

3. 验证机构与职责............................................. 错误!未定义书签。

4. 定义....................................................... 错误!未定义书签。

5. 参考文件................................................... 错误!未定义书签。

6. 风险因素分析............................................... 错误!未定义书签。

7. 验证准备................................................... 错误!未定义书签。

8. 检测方法的描述............................................. 错误!未定义书签。

9. 验证实施................................................... 错误!未定义书签。

10. 偏差与变更............................................... 错误!未定义书签。

11. 确认结果评定与结论....................................... 错误!未定义书签。

12. 确认周期................................................. 错误!未定义书签。

13. 附录目录................................................. 错误!未定义书签。

1 目的对苦参膜中的含量测定检测方法进行确认，确保方法的可行性，以便为有效控制苦参膜的含量提供依据。

2 范围本方案适用于*****药业股份有限公司齐墩果酸片含量测定方法的确认。

3 验证机构与职责3.1验证小组成员3.2 职责3.2.1验证小组组长职责3.2.1.1保证确认方案及各种检查表的起草。

3.2.1.2保证在执行前完成对确认方案及各种检查表的审核和批准。

3.2.1.3负责对确认小组成员进行本方案的培训。

3.2.1.4保证完全按照确认方案实施。

3.2.1.5确保能及时发现偏差，并按照已经达成一致的偏差处理方法对其进行记录、纠正、调查和最终确认。

3.2.1.6确保确认报告的生成、审核和批准。

3.2.2QA职责3.2.2.1执行前完成对确认方案及各种检查表的审核。

3.2.2.2负责确认过程的监控和检查，保证确认方案的实施，参与确认结果评价。

3.2.2.3参与确认偏差的调查、处理、和评估。

3.2.2.4确认过程中，如有变更，保证按《变更处理程序》执行。

3.2.3其它成员职责3.2.3.1执行前确认确认方案已批准，并经过培训。

3.2.3.2按确认方案实施确认，收集、整理确认数据，完成确认记录和报告。

3.2.3.3参与确认偏差的调查和处理，确认通过偏差修订和解决方案。

3.2.3.4确认确认过程中的变更在实施前已经批准。

4 定义4.1线性：指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

4.2准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。

4.3重复性：再规定范围内，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价。

4.4中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员或用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度。

5 参考文件5.1 药品生产质量管理规范（2010年修订版）5.2 药品生产验证指南5.3 中国药典（2015年版）二部5.4《国家药品监督管理局国家药品标准》5.5 公司相关文件：5.5.1苦参膜质量标准及检验规程（）5.5.2验证管理（）5.5.3变更控制操作规程（）5.5.4偏差处理操作程序（）5.5.5纠正措施与预防措施操作规程（）5.5.62016年度验证总计划6 风险因素分析风险评估将采用失效模式及影响（FMEA）的工具来评估和衡量方法参数失效后对产品分析结果的影响。

评估过程将参照公司质量风险管理的要求，风险等级为低、中、高级别的必须给出合理的建议措施，之后再次对建议的风险控制措施进行评估以确保风险的降低，分析、评估结果见附录1《风险评估表》。

7 验证准备确保所有方法SOP是最新版本且经过批准，将检查结果记录在附录2《文件检查》内。

确认参与验证的人员都经过此方案和相关SOP的培训，和识别所有签字和草签本方案任何数据表的人员。

将检查结果记录在附录3《培训检查和签名确认》内。

7.3确认验证过程中用到设备、计量仪器都是经过校验，并在有效期内，将检查结果记录在附录4《确认用仪器/仪表校准检查》内。

8 检测方法的描述药品与试剂的准备***对照品（中国药品生物制品检定院提供），***（为*****药业股份有限公司生产）；硅钨酸试液、碘化汞钾试液、苦味酸、氯仿、甲醇、浓氨、稀碘化铋钾试液、盐酸液（L）、氢氧化钠液（1mol/L）、氢氧化钠滴定液（L）、硫酸滴定液（L）、甲基红示液、磷酸、乙腈、无水乙醇。

仪器分析条件电子天平（FA2014）、超声池（KQ-300DE）、电热恒温水浴锅（DK-98-1）、高效液相（LC-10ATVP)8.3检测方法显色鉴别、色谱鉴别、酸碱滴定法、高效液相色谱法检测操作鉴别显色鉴别：样品连续三批，A、B两位组员各取样品1号、样品2号约，分置三支试管中，加水2ml使溶解，分别加硅钨酸试液、碘化汞钾试液及苦味酸试液1～2滴，分别生成白色、淡黄色及黄色沉淀。

薄层鉴别：样品连续三批，A、B两位组员分别取本品，加甲醇10ml使溶解，超声提取15分钟，静置，取上清液作为供试品溶液；另取苦参碱及氧化苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml中各含5mg的溶液作为对照品溶液，照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一以%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（5::）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个斑点。

酸碱滴定法：连续三批样品，两位组员分别取样品1、样品2，各10片，剪碎，取一片重两份，各精密称定，加氯仿25ml回流3次，每次1小时，合并提取液，置水浴上挥干，残渣用L盐酸液5ml使溶解，滤过，滤液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀，用三氯甲烷振摇提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤，再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。

合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸过的冷水20ml，振摇提取后，分取酸层，氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次，每次10ml，合并酸液与洗涤液，置水浴上加热，除去残留的三氯甲烷，放冷至室温，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（L）滴定。

每1ml的硫酸液（L）相当于的C 15H24N2O2。

本品每片含总生物碱以****%～%。

相对偏差（dr%）不得超过%计算公式：4322110100100⨯⨯⨯⨯⎪⎭⎫⎝⎛⨯-⨯=MmTCCVCCVCC1：硫酸滴定液的实际浓度（mol/L)；C2：硫酸滴定液的理论浓度（mol/L)；C3：氢氧化钠滴定液的实际浓度（mol/L)； C4：氢氧化钠滴定液的理论浓度（mol/L)；V1：加入硫酸滴定液的体积（ml)；V2：消耗氢氧化钠滴定液的体积(ml)；T ：标示量（；m：该批20片苦参膜的平均重量(g)；M ：使用苦参膜的量（g)。

.4高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验：用氨基键合硅胶为填充剂：以乙腈-无水乙醇-3%磷 酸溶液（85::）为流动相；柱温30℃，检测波长为220nm ，流速／min ，理论塔板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于5000。

对照品溶液的制备： 取******对照品适量，精密称定，置同一量瓶中，加乙腈-无水乙醇（85:15）制成每1ml 含苦参碱和氧化苦参碱35μg 的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备： 取已剪碎的样品约，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨水，精密加入三氯甲烷25ml ，称定重量，超声处理30分钟，放冷，加三氯甲烷补足损失重量，滤过，精密吸取续滤液5ml ，水浴上挥干，用乙腈-无水乙醇（85:15）定溶至25ml 量瓶中，摇匀，用μm 滤膜滤过，即得。

测定法： 分别精密吸取对照品溶液5μl 与供试品溶液5～10μl ，注入高效液相 色谱仪，测定，即得。

本品每片含******不得少于 mg 。

相对标准偏差不得过2%。

计算公式: ① 221A A A +=② ()样品平均片重稀释倍数样品称量对照品平均峰面积对照品浓度样品峰面积⨯⨯⨯⨯=g mg C /A : 对照品进两针的平均峰面积； 1A : 对照品第一针峰面积； 2A : 对照品第二针峰面积。

9 验证实施 线性实验目的：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度应符合规定。

滴定法 实验过程同一人同时取同一批样品，各10片，剪碎，取一片重样品1、样品2、样品3、样品4、样品5，各精密称定，加氯仿25ml回流3次，每次1小时，合并提取液，置水浴上挥干，残渣用L盐酸液5ml使溶解，滤过，滤液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀，用三氯甲烷振摇提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤，再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。

合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸过的冷水20ml，振摇提取后，分取酸层，氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次，每次10ml，合并酸液与洗涤液，置水浴上加热，除去残留的三氯甲烷，放冷至室温，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（L）滴定。

每1ml的硫酸液（L）相当于的C 15H24N2O2。

本品每片含总生物碱以氧化苦参碱(C15H24N2O)计，应为标示量的%～%。