研钵、剪刀、漏斗、滤纸、移液管（1mL）、 试管及试管架、洗耳球、酒精灯等。 • 试剂：丙酮、80%丙酮、醋酸酮、5%盐酸、 碳酸钙、石英砂等
实验步骤
鲜叶4 g，加丙酮10 ml及少许碳酸
1
钙和石英砂，匀浆，以漏斗过滤之
再加丙酮20 ml洗并过滤，即为色素提取液。放于暗处备用。
取少许于另 3 一试管中
• 叶绿素要避光保存。
实验作业
1 按照规范写出实验报告，以两组结果比较进行结 果分析与讨论。
2.色素分离开始三次加蒸馏水的目的是什么，加乙 醚的作用又是什么？
下次实验内容 1 和教师讨论自己的方案的最后时间节点 2 选择学习光合强度的测定
取3 ml于另 一试管中 2
1滴1滴加浓盐酸，直
5
至溶液出现褐绿色
4 取20 ml
用于绿色素与 黄色素的分离
加醋酸铜晶体少许，慢慢加热 溶液，则又产生鲜亮的绿色
分别观察在反射光和透射光一 侧，提取液的颜色有无不同 ； 观察色素溶液的吸收光谱
实验步骤 绿色素与黄色素的分离
取20 ml色素提取液加到盛有20 ml乙醚的分液漏斗中，摇动 沿漏斗边缘加入30 ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗， 静止10分钟，溶液即分为两层。弃去下层水相； 再用蒸馏水冲洗乙醚溶液1次，弃去下层水相。
• 纸层析方法：根据色素在不同有机溶剂中的 溶解度不同以及在吸附剂上的吸附能力不同， 可将它们彼此分离开。 （定性，小量） （今天选择做）
• 皂化反应和萃取分离方法（大量，定量）
叶绿素a和b含量的测定方法—分光光度法
• 根据Lambert-Beer定律 ： OD1=Ca·ka1+Cb·kb1 （1） OD2=Ca·ka2+Cb·kb2 （2）
Ca=12.7 OD663-2.69 OD645
（3）
Cb=22.9 OD645-4.68 OD663
（4）
CT= Ca+ Cb=8.02 OD663+20.21 OD645 （5）
• Ck=4.7OD440- 0.27Ca+b
叶绿体色素的理化性质
（1）叶绿素与类胡萝卜素都有一定的吸收光谱， 可用分光镜检查或用分光光度计精确测定；
实验步骤 叶绿素a和b的测定
鲜叶0.5 g，加丙酮5 ml及少许碳酸钙和石英砂，匀浆，将 匀浆转入量筒中，并用适量80%丙酮洗涤研钵，用80%丙酮 定容至10ml
吸取2.5ml加入有10ml80%丙酮的量筒中，过滤，滤液备用
取上述色素提取液4ml，以80%丙酮为对照，分别测定 663nm、645nm和 440nm处的光密度值。
第二单线 态10-12 S
第一单线 态10-9 S
能 量
基态
680nm 670nm
430nm
能热
分子内能量传
递
传向反应中
吸吸
心
收收
热
光
荧能
光光
三线态 磷 10-3~10-2 S 光
热 能
Chl的荧光和磷光现象----反射光中 能观察到呈红色的荧光；
叶绿素化学性质不稳定，光容易受 强光的破坏
叶绿体色素的分离方法
按公式（3）、（4）、（5）分别计算色素提取液中叶绿素a、 叶绿素b、及叶绿素a+b的浓度，类胡萝卜素浓度。再根据稀释 倍数分别计算每g鲜重叶片中色素的含量。
注意事项
• 实验中注意安全，石油醚、丙酮等试剂要 远离火源。尤其注意做铜代反应时避免伤 人。
• 研磨过程中丙酮要少量多次加入，以免研 磨时四处飞溅。
加入8ml 30％KOH甲醇过饱和溶液，用力摇动Байду номын сангаас液漏斗5 分钟以上，皂化要彻底，直至颜色变为棕褐色
静置约10min 加蒸馏水约10ml，摇动后静置分离，则得到黄色素层和绿色素层
分别收集并保存于试管中
实验步骤
5 观察色素溶液的吸收光谱
(1)调节分光计，观察电灯光的光谱； (2)观察色素丙酮提取液，用丙酮将溶液稀释1倍比较之； (3)观察黄色素乙醚溶液，用乙醚将溶液稀释1倍比较之； (4)观察皂化叶绿素甲醇溶液，用甲醇将溶液稀释1倍比较之； （今天选择做） (5)观察铜代叶绿素溶液。 （今天选择做）
（2）叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光； （3）叶绿素的化学性质很不稳定，易受强光破
坏； （今天选择做） （4）叶绿素中的镁可被H+取代而成褐色的去镁
叶绿素；加入铜盐作用，后者则成为绿色的 铜代叶绿素。
实验材料和器材
• 实验材料：（两组组合，每组做一种植物材 料，最后两组结果放在一起分析）
• 器材：721型分光光度计、电子天平、量筒、
叶绿体色素的提取、分离、理 化性质鉴定及含量测定
实验目的：分析校园中两种植物 材料叶绿体色素的差异
内容：
①叶绿素a和b含量差异； ②绿色素与黄色素的含量差异
色素提取分离的原理; 叶绿素测定的方法及其原理； 绿色素与黄色素的纯化原理及步骤； 叶绿素的理化性质的鉴定方法
实验原理
Photosynthesis
Thermosynechococcus
elongatus(蓝细菌)
PS I
PS II
光合色素的脂溶性----- 酒精、丙酮等有机溶剂提取
Chl是双羧酸的酯---皂化反应---叶绿素与类胡萝卜素 分离
Chl的取代反应：卟啉环中的Mg2+可被H2+、Cu2+、 Zn 2+取代
光学特性：
• Chla Chlb有两个强吸收峰----含量测定时选择叶绿素 特有的红光吸收峰波长；