•提取液通过小柱 •由于抗体保留 •抗原被分离出来并 •将溶剂通过校准 •使抗体发生变性
•被浓缩
•抗原被洗脱下来
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取 •净化
•测定
•净化效果：耗材验证（载量，净化效果等）
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取
•
பைடு நூலகம்
一、我国食品中真菌毒素现状
食品真菌毒素不合格突出情况
•总局关于27批次食品不合格情况的通告（2016年第 49号）：薯类及膨化食品不合格样品1批次：北京锅 巴油炸膨化食品中黄曲霉毒素B1检出值为 25.1μ g/kg，标准为20μ g/kg，超标0.3倍。 •总局关于2批次花生油不合格的通告（2016年第9 号）：一级压榨花生油中黄曲霉毒素B1检出值为 79.8μ g/kg，标准为20μ g/kg，超标3.99倍。 •国家食品药品监督管理总局关于5批次花生油不合格 的通告（2015年 第90号）：赛金河压榨纯正花生油、 浦生压榨一级花生油、晟凯纯正花生油、惠景园花 生油、晟美鲜顶级纯正花生油黄曲霉毒素B1不符合食 品安全国家标准。
•2、定量法 定量法一般有高效液相色谱法 (HPLC)、 以及经典的薄层 色谱法（TLC）等。其中 ，高效液相色谱结合荧光或紫外检测器法 （HPLC）因其灵敏度高、检测限低、自动 化程度高等优点在国际上得到了最为广泛 的使用。 •3. 确诊法 应用超高压液相色谱-电喷雾串联四极 杆质谱联用技术UPLC-MS/MS，在多反应 离子监测模式（MRM）对食品中真菌毒 素污染进行检测。
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取 •净化
•测定
•采样：采样步骤是真菌毒素检测中最大的变异或误差来源。
•原因：被污染的颗粒在大宗产品中的分布不均匀，尤其是 农产品，少部分颗粒收到真菌毒素污染，但却含有较高的真 菌毒素含量。 •处理：提高采样量能有效降低采样环节对检测结果的影响。
•2017年食品安全国家抽检计划中包含GB 2761中所有真 菌毒素。涉及食品品种有：
•炒货食品及坚果制品、豆制品、方便食品、罐头、酒类、粮食加工品、乳 制品、食用农产品、食用油、油脂及其制品、蔬菜制品、薯类和膨化食品、 水果制品、速冻食品、特殊膳食食品、特殊医学用途配方食品、调味品、 饮料、婴幼儿配方食品
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取 •净化
•测定
美国USDA-GIPSA在黄曲霉毒素检测程序手册中规 定了不同批次类型谷物和谷物产品中黄曲霉毒素 检测的最小扦样量。 国际标准组织（ISO）2009年颁布的谷物和谷物制 品的扦样标准中还特别规定了真菌毒素检测时的 扦样程序，被欧盟等同采用。
食品中真菌毒素指标检测关键点 及案例分析
2017年3月
主要内容
1
我国食品中真菌毒素现状
2
3 4
食品中真菌毒素检测技术概述
食品中真菌毒素检测的难点和关键点 食品中真菌毒素检测案例分析
一、我国食品中真菌毒素现状
抽检监测常见真菌毒素类型
•黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 •黄曲霉毒素M1 •脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素） •展青霉素（棒曲霉素） •赭曲霉毒素A •玉米赤霉烯酮 •伏马毒素 •T-2毒素
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取 •净化
•测定
•多功能净化柱原理
填充材料为反相树脂、 阴离子交换树脂及阳离 子交换树脂的混合材料
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取
•样品
•净化
•洗涤
•测定
•洗脱
•免疫亲和柱原理
填充材料为结合有真 菌毒素特异抗体的树 脂
真菌毒素抽检中应注意什么？
•方法选择 •实验安全 •实验操作要点 •食品分类判定 •样本污染不均匀 •不合格原因分析排查 •区域性，季节性，品种等
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 方法选择
•第三法
•第四法
•第五法
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 方法选择
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验安全
pH值。 •溶剂系统：
•温度：
•提取方式： •食品基质：
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取 •净化
•测定
•除去干扰杂质，保留待测组分
真菌毒素含量低，前处理多采用免疫亲和柱、净化柱进行富集净化。 净化柱：谷类、豆类及种子类
免疫亲和柱：香辛料、加工食品、其他多功能柱净化不充分的样品
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点
•人机料法环 •人：标准培训；检验技术掌握；人员防护； •机：方法的选择；分方法讲解。 •料：不同公司免疫亲和柱使用时要看说明，以便达到最好 的效果；免疫亲和柱柱效，每批次都要验证，批间差异， 载量和亲和效果；固相萃取柱：柱效和载量；酶联免疫试 剂盒：批间差异，比对及阳性验证。标准品不同品牌和类 型的比较； •法：方法适用范围；酶联免疫筛查；基质干扰，条件随色 谱柱检测效果调整；不同方法比对； •环：独立区域操作
一、我国食品中真菌毒素现状
食品添加剂限量标准
•食品中真菌毒素限量： GB 2761
•规定真菌毒素种类： 黄曲霉毒素B1 黄曲霉毒素M1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 展青霉素 赭曲霉毒素A 玉米赤霉烯酮
•
一、我国食品中真菌毒素现状
食品真菌毒素抽检不合格情况
•2016年总局发布的食品安全抽检信息中，生物毒素污染 占不合格样品的1.1%。公众关注度较高的小麦粉中的黄 曲霉毒素B1连续三年抽检合格，花生油中的黄曲霉毒素 B1抽检合格率三年逐年提高。
以黄曲霉毒素B1为例：
1)强致癌性物质，使用时应谨慎，建议选用液体标准品。 2)实验使用的器具，前处理使用的小柱，样品等，丢弃或者清洗前应使用浓度为 0.5-1.0%（v/v）的次氯酸钠浸泡2小时以上。 3)从洗脱液除去溶剂时，有时黄曲霉毒素会附着在容器上，建议使用硅烷处理过的 容器。
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
食品真菌毒素不合格突出情况
•
一、我国食品中真菌毒素现状
总局有关食品中真菌毒素的风险解读
真菌毒素-黄曲霉毒素类（AF)
•黄曲霉毒素B1是影响人和动物健康的主要真菌毒素之一，也是全球食品安全控 制中最主要的真菌毒素。2003年联合国粮农组织（FAO）发布的全世界食品和饲 料真菌毒素法规报告中显示，除国际食品法典委员会（CAC）的规定以外，全球 100多个国家和地区制定了各类食品中黄曲霉毒素限量标准。食品中黄曲霉毒素 B1的限量范围为1-20ppb，黄曲霉毒素总量（AFB1、B2、G1、G2）的限量范围为 0-35ppb。
食品基质复杂，干扰成分各异 涉及食品品种，样品制备有差异 批量检测耗时，检验系统维护 过程控制加强，防控漏判误判 检测方法更新，方法证实要求 样本均匀性问题，复检风险
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 参考的标准及法规
GB5009.1 食品理化检验方法 总则（征求 意见稿） GB/T27404 实验室质量控制规范 食品理 化检测 GB/T32465 化学分析方法确认和内部质量 控制要求 GB/T6379系列 测量方法与结果的准确度 欧盟及CAC相关指南
真菌毒素理想的检测方法，应该是先 进、快速、灵敏、准确、经济、简单、 安全的。 真菌毒素实验室检测方法一般分为 1、快速筛选法 2、定量法 3、确证法
•1. 快速筛选法
目前，国际上使用较为普遍的真菌毒素 快速筛选法有荧光光度计法和酶联免疫 法。前者常常结合免疫亲和柱净化使用 ，是美国AOAC的标准检测方法，以黄 曲霉毒素检测为例,它可以 检测黄曲霉 毒素总量达到2ppb以下，符合欧盟的指 令要求。缺点：假阳性率高。
二 食品中真菌毒素检测技术概述
•主要使用方法： •酶联免疫吸附筛查法 •高效液相色谱-柱前衍生法 •高效液相色谱-柱后衍生法 •液相色谱-串联质谱法 •薄层色谱法 •免疫亲和层析净化液相色谱法及液质串联法 •离子交换固相萃取柱净化高效液相色谱法 •间接ELISA法 •荧光光度法
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 项目检测
•花生及其制品？ •瓜子？ •豆瓣酱？（辣椒原料，工艺？） •复合调味料？ •蒸肉米粉？ •芝麻酱？ •普洱茶？ •牛奶（黄曲霉毒素M1)?
•应用篇
含黄曲霉毒素样品
玉米、花生、花生油，坚果和干果（核桃、杏仁）、大米 、其它食用油 其它粮食（麦类、面粉、薯干）、发酵食品（酱油、食用 醋、豆豉、腐乳制品）、淀粉类制品（糕点、饼干、面包 、裱花蛋糕） 牛乳及其制品、黄油、新鲜猪组织（肝、肾、血、瘦肉）
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取 •净化
•测定
颗粒样品的粉碎和进一步混合非常重要。
例：GB5009.22-2016项下规定了样品采样量及制备方式
三 食品中真菌毒素检测的难点和关键点 实验操作要点
•采样制备 •提取 •净化
•测定
•影响因素
•待测毒素的性质：提取酸性真菌毒素，通常需提高溶剂体系中水相
二 食品中真菌毒素检测技术概述
标准整合更新： 1. GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和 G族的测定 2. GB 5009.24-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的 测定 3. GB 5009.25-2016 食品安全国家标准 食品中杂色曲霉素的测 定 4. GB 5009.96-2016 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测 定 5. GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌 烯醇及其乙酰化衍生物的测定 6. GB 5009.118-2016 食品安全国家标准 食品中T-2毒素的测定 7. GB 5009.185-2016 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定 8. GB 5009.209-2016 食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的 测定 9. GB 5009.240-2016 食品安全国家标准 食品中伏马毒素的测定