酶活性测定
1、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)
试剂：0.1% p-nitrophenylphosphate disodium salt（P-硝基苯磷酸二钠）
0.2mol/L 碳酸盐/碳酸氢盐缓冲溶液(pH: 9.6)——buffer
0.2mol/L NaOH
测定步骤：(1) 加入样品之前，0.1% P-硝基苯磷酸二钠及buffer 37°C孵化30 min；
(2) 1mL污泥样品+1mL0.1% P-硝基苯磷酸二钠+2mL buffer 37°C孵化30 min；
(3) 加入2mL 0.2mol/L NaOH终止反应；
(4) 2500g 离心，上清液在410nm测定吸光度。

计算：
每个污泥样品酶活性的测定均包含两个平行样S+一个空白样品S0。

[(S1- S0)+(S2- S0)]/2*0.704 (Eu)
2、酸性磷酸酶(Acid phosphatase)
试剂：0.1% p-nitrophenylphosphate disodium salt（P-硝基苯磷酸二钠）
0.2mol/L HAc/Ac缓冲溶液(pH: 4.8)——buffer
0.2mol/L NaOH
测定步骤：(1) 加入样品之前，0.1% P-硝基苯磷酸二钠及buffer 37°C孵化30 min；
(2) 1mL污泥样品+1mL0.1% P-硝基苯磷酸二钠+2mL buffer 37°C孵化30 min；
(3) 加入2mL 0.2mol/L NaOH终止反应；
(4) 2500g 离心，上清液在410nm测定吸光度。

计算：
每个污泥样品酶活性的测定均包含两个平行样S+一个空白样品S0。

[(S1- S0)+(S2- S0)]/2*0.719 (Eu)
3、a-葡萄糖甘酶(a-glucosidase)
试剂：0.1% p-nitrophenyl a-D glucopyranoside（p-硝基苯-Α-D-葡吡喃糖苷）
0.2mol/L Tris-HCl (pH: 7.6)
测定步骤：(1) 加入样品之前，0.1% p-硝基苯-Α-D-葡吡喃糖苷及Tris-HCl 37°C 孵化30 min；
(2) 1mL污泥样品+1mL 0.1% p-硝基苯-Α-D-葡吡喃糖苷+2mL Tris-HCl 37°C孵化
60 min；
(3) 沸水加热3min 终止反应；
(4) 2500g 离心，上清液在410nm测定吸光度。

计算：
每个污泥样品酶活性的测定均包含两个平行样S+一个空白样品S0。

[(S1- S0)+(S2- S0)]/2*0.299 (Eu)
4、蛋白酶(Protease)
试剂：0.5% azocasein（偶氮酪蛋白）
测定步骤：(1) 加入样品之前，0.5% azocasein及0.2mol/L NaOH 37°C孵化30 min；
(2) 3mL污泥样品+1mL 0.5% azocasein 37°C孵化90 min；
(3) 加入2 ml 10% 三氯乙酸(TCA) 终止反应；
(4) 2500g 离心，2mL上清液加入2mL NaOH在440nm测定吸光度。

计算：
每个污泥样品酶活性的测定均包含两个平行样S+一个空白样品S0。

[(S1- S0)+(S2- S0)]/2*2.22 (Eu)
5、脱氢酶(Dehydrogenese)
试剂：0.2% INT（碘硝基四唑）
测定步骤：(1) 加入样品之前，0.2% INT及去离子水37°C孵化30 min；
(2) 2mL污泥样品+1.5mL 0.2% INT+ 3mL 去离子水37°C孵化30 min；
(3) 加入0.5 ml 37% 福尔马林终止反应；
(4) 4°C 1500g 离心，排掉上清液，加入5mL 4+6 四氯乙烯/丙酮，4°C 避光静置30 min，1500g 离心10min，490nm测定上清液吸光度。

计算：
每个污泥样品酶活性的测定均包含两个平行样S+一个空白样品S0。

[(S1- S0)+(S2- S0)]/2*0.884 (Eu)。