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生物化学实验

2.用蛋白溶液实验:取2ml蛋白溶液,加入0.5ml米伦试剂,此时出现蛋白质的沉淀。小心加热,凝固之蛋白质出现红色。
3.用白明胶(也是一种蛋白)做上述实验,结果如何?
(二)双缩尿反应
1.取少许结晶尿素放在干燥试管中,微火加热,尿素熔化并形成双缩尿,释出之氨可用红色石蕊试纸检测。至试管内有白色固体出现,停止加热,冷却。然后加10%NaOH溶液1ml摇匀,再加2滴1%CuSO4溶液,混匀,观察有无紫色出现。
6.尿素:如颗粒较粗,最好研成细粉末状。
7. 10%NaOH溶液:10gNaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml。
8.浓硝酸:比重1.42
9. 1%硫酸铜溶液:硫酸铜1g溶于蒸馏水,稀释至100ml。
10.硫酸铵晶体:如颗粒太大,最好研碎。
11.饱和硫酸铵溶液:蒸馏水100ml,加硫酸铵至饱和。
12. 95%乙醇
纱布过滤,滤液备用。
主要内容
1.过氧化氢酶实验:
取试管4支,按下表加入试剂:
管号
2%H2O2
(ml)
新鲜猪肝糜
(g)
煮熟肝糜
(g)
生马铃薯
(g)
熟马铃薯
(g)
1
2
3
4
3
3
3
3
0.5




0.5




1


-ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ

1
加完,观察有无气泡产生,特别注意肝糜周围和马铃薯周围。
2.过氧化物酶实验:
取试管4支,按下表编号加入试剂:
取蛋白质溶液1ml,加晶体NaCl少许(加速沉淀并使沉淀完全),待溶解后再加入95%乙醇2ml混匀,观察有无沉淀析出。
(七)重金属沉淀蛋白质
取试管2支各加入蛋白质溶液2ml,一管内滴加2~3%醋酸铅(或AgNO3),另一管内滴加1%硫酸铜溶液至有沉淀析出。
(八)生物碱沉淀蛋白质
取试管2支各加入2ml蛋白质溶液及1%醋酸溶液4~5滴,向一管中加5%鞣酸溶液数滴,另一管中加入饱和苦味酸溶液数滴,观察结果。
(五)蛋白质盐析作用
1.取蛋白质溶液5ml于试管,再加入等量饱和硫酸铵溶液(此时硫酸铵的浓度为50%饱和),微微摇动试管,使溶液混合后静置数分钟,球蛋白即析出(如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵)。
2.将上述混合溶液过滤,滤液中加入硫酸铵粉末,至不再溶解,析出的为清蛋白,再加水稀释,观察沉淀是否溶解。
(六)酒精沉淀蛋白质
取4支试管,各加1mlBenedict试剂,混合均匀后,分别加4滴2%葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及1%淀粉溶液,摇动均匀,将各试管同时放入沸水浴中加热2~3分钟,然后取出放在试管架上冷却,注意观察试管中溶液颜色变化,是否有红色沉淀生成。
2、蔗糖水解
取2支试管,编号后,分别加1ml2%蔗糖和1~2ml蒸馏水,向甲管中加3~5滴2%硫酸溶液,乙管中加3~5滴蒸馏水,混合均匀,然后将两支试管同时放入沸水浴中加热10~15分钟,取出两支试管放在试管架上冷却,甲管用10%NaOH溶液中和至中性。再向甲乙管中各加1mlBenedict试剂,摇动均匀,将两支试管同时放入沸水浴中加热2~3分钟,观察甲、乙两管中颜色的变化,说明什么问题。
管号
1%焦性没食子酸
2%H2O2
蒸馏水
白菜梗提取液
煮沸的白菜梗提取液
1
2
3
4
2ml
2ml
2ml
2ml
2滴

2滴
2滴
2ml




2ml
2ml




2ml
摇匀后,观察并记录各管颜色变化和沉淀情况。
实验六维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
还原型维生素c(抗坏血酸)能还原染料2,6—二氯酚靛酚(Dichlorophenolindo pheno1一DCPIP).本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中,2,6—二氯酚靛酚呈红色,还原后变为无色。因此.当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时,维生素C尚未全部被氧化前,则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以,当溶液从无色转变成微红色时即表示溶液中的维生索C刚刚全部被氧化,此时即为滴定终点。如无其他杂质干扰.样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
2. 1%苯酚溶液:苯酚1ml,加蒸馏水稀释至100ml。
3. 1%白明胶液:1g白明胶溶于少量热水,完全溶解后稀释至100ml。
4.米伦(Millon)试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(比重1.42),水浴加温助溶,溶解后加二倍体积蒸馏水,混匀,静置澄清,取上清液备用。此试剂可长期保存。
5. 0.5%茚三酮溶液:0.5g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。
3、淀粉与碘的作用
取一支试管加10滴1%淀粉溶液和1滴0.1%碘液,溶液立即出现蓝色,将试管放入沸水浴中加热5~10分钟,观察有何现象发生,然后取出试管,放置冷却,又有何变化。
4、淀粉的水解
取1个小烧杯加10ml1%淀粉溶液和8滴浓盐酸,沸水浴中加热,每隔2~5分钟取出1小滴淀粉水解液在白瓷板上,滴1滴0.1%碘液,注意观察其颜色的变化,直到无蓝色出现为止。冷却后,向小烧杯中逐滴加入20%NaOH溶液至弱碱性为止,此时,取出1ml淀粉水解液于1支试管中,1支试管加1ml1%淀粉溶液,在此2支试管中分别加入Benedict试剂,摇动均匀后,将2支试管同时放入水浴中加热2~5分钟,观察颜色变化,说明什么?
新鲜猪肝糜
试管1.5×15cm(×4
吸管5ml(×1)、2ml(×4)
天平
水浴锅
剪刀
白菜梗
棉花或纱布
胶头滴管
研钵
漏斗Φ8cm(×1)
试剂
1. 2%过氧化氢溶液
2. 1%焦性没食子酸水溶液:焦性没食子酸1g,溶于100ml蒸馏水。
3.白菜梗提取液:白菜梗约5g切成细块,置研钵内,加蒸馏水约15ml,研磨成浆,经棉花或
2.另取一只试管,加蛋白液10滴,再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴,混匀,是否出现紫玫瑰色。
注意硫酸铜不能多加,否则产生深蓝色的干扰络离子。
(三)黄色反应
于一试管内,置蛋白溶液10滴及浓硝酸3~4滴,加热,冷却后再加入10%NaOH溶液5滴,观察颜色变化。
(四)茚三酮反应
取1ml蛋白溶液置于试管中,加2滴茚三酮试剂,加热至沸,即有蓝紫色出现。注意此反应必须在pH5~7进行。
沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色,说明核糖的存在。
3.磷酸:取一支试管,加水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热,观察溶液是否变成兰色,说明磷酸是否存在。
实验四糖的化学性质
淀粉和蔗糖缺乏自由醛基(苷羟基)无还原性。但在酸的作用下,淀粉和蔗糖很容易水解成为糊精及少量麦芽糖、葡萄糖,使之具有还原性。淀粉溶液遇碘呈蓝色。
2. RNA组份鉴定:取上述RNA约0.5g,加10%硫酸溶液5ml,加热至沸1~2分钟,将RNA水解。
1.嘌呤碱:取水解液2ml加入浓氨水2ml,然后加入约1ml5%硝酸银溶液,观察有无嘌呤碱
的银化合物沉淀。
2.核糖:取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放
实验二双缩尿法测定蛋白质浓度
具有两个或者两个以上肽键的化合物皆有双缩尿反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,故可用双缩脲法测定蛋白质的含量(借助分光光度计可减小误差)。
实验一蛋白质的颜色反应与沉淀反应
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反应。不同蛋白质所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦可不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应,因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白物质的定量测定的依据。
2.样品测定:取未知浓度的蛋白质3.0nl置试管内,加入双缩尿试剂2.0ml,混匀,测定540nm的吸光度,对照标准曲线求得未知液蛋白质浓度。
实验三酵母核糖核酸(RNA)的分离及组份鉴定
酵母核酸中RNA的含量较多,DNA少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙
醇使其沉淀,由此即可得到粗RNA制品。用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
仪器
容量瓶10ml(×6)
试管1.5×15cm(×8)
吸管5ml(×3)、2ml(×1)
721分光光度计
试剂
1.双缩尿试剂:将0.1750gCuSO4·5H2O溶于约15ml蒸馏水,置于100ml容量瓶,加入30ml浓氨水、30ml冰冷的蒸馏水和20ml饱和氢氧化钠溶液,摇匀,室温放置1~2小时,再加蒸馏水至刻度,摇匀备用。
13.结晶氯化钠
14. 2~3%醋酸铅(或AgNO3):2~3g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。
15. 5%鞣酸溶液:5g鞣酸溶于蒸馏水并稀释至100ml
16.饱和苦味酸溶液
17.1%醋酸溶液:冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。
主要内容
(一)米伦氏反应
1.用苯酚实验:取1%苯酚溶液1ml于试管中,加米伦氏剂约0.5ml,小心加热溶液即出现玫瑰红色。
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组份。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组份的存在。
实验材料与仪器
干酵母粉(市售)
鲜酵母
PH试纸
天平
烧杯100ml(×1)
量筒50 ml(×1)、10 ml(×1)
抽滤瓶500 ml(×1)、布氏漏斗Φ10cm(×1)
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