第6章植物内生菌资源
3.1 植物内生真菌
2）主要或只在植物地上部分的组织内在在 水平传播； 形成高局部性的感染；对宿主植物的有益或有害作用 不存在环境特殊性；多样性水平高。
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2.4 分离培养基
（一）细菌分离培养基 TSA：大豆酪蛋白琼脂培养基。
酪蛋白胰酶消化物 15g 大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g 氯化钠 5g 琼脂 15g 纯化水 1000ml
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R2A培养基也是沉 降法检测环境微 生物的标准配方
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非麦角类内生真菌：能从无症状的非维管植物及蕨类、 裸子和被子植物等维管植物中分离获得的内生真菌。
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3.1 植物内生真菌
（一）麦角类内生真菌 一小部分进化上相关的麦角菌物种，比较难于培养，
且仅与一些冷暖型草种共生，通常能在植物的茎内形 成细胞间的系统性感染，主要通过垂直形式传播，从 植物母体通过种子传播给下一代。 Clay &Schardl又将这一类内生真菌分为Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ 型。（含义掌握） 通常这类内生真菌可以促进植物生物量的积累，提高 其耐旱能力，产生一些对动物有毒害的化学物质。
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2.4 分离培养基
（三）真菌分离培养基 （四）特殊目的菌选择性分离培养基 （五）添加抑制剂
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第三节 植物内生菌资源和种类与分布
推测地球上每一种植物，无论是单子叶还是双子叶植物都有内 生菌存在。 植物内生菌资源的研究主要采用纯培养（culture-dependent)和 免培养（culture-ihdependent)技术与手段。
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第一节 植物内生菌的发现及其研究意义
Petrini 1991:内生微生物的定义应该强调，感染寄主时 不表现出症状，但是经过一段潜伏期后，可能也会引 起病害。
Hirsch & Braun 1992：定殖于于活体植物组织内，且 不引起任何即时的、明显的负面影响的真菌。
因此：目前内生微生物的定义涵盖性上看，实质上包 括了定殖于植物组织内部的任何微生物。
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2.4 分离培养基
（二）放线菌分离培养基 在内生放线菌的分离中，由于放线菌的生长缓慢，通
常培养一个月左右才在植物表面有菌落长出。因此， 想获得尽可能多的放线菌，既要尽量抑制真菌和其他 细菌的生长，同时也要尽可能避免影响内生放线菌的 生长。 许多研究者认为，一些贫营养的培养基和土壤放线菌 分离常用的部分经典培养基，在内生放线菌的分离中 均取得了较好的效果。
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2.2 表面消毒
1.Samish等总结比较总结不同的消毒技术后，推荐的 标准消毒技术程序：首先用自来水或商品净化剂反复 冲洗植物材料表面，按照材料的不同决定不同次氯酸 钠、乙醇或是升汞的最佳消毒时间，再用无菌水冲洗， 最后，用无菌滤纸吸干水分。其中次氯酸钠与乙醇联 用，是最常用的表面消毒程序。
2.特殊的处理：吐温20、吐温80和TritonX-100等表面 活性剂，可以减少溶剂的表面张力，使其充分作用于 植物表面的凹陷处
3.检验表面消毒效果的方法：3种方法（教材208页）
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2.3 样品预处理
（一）组织块分离法 （二）组织浸渍法 （三）组织离心法 （四）真空与压力抽取植物体液 （五）其他方法
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第二节 植物内生菌的分离
本节为重点掌握内容。
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2.1 样品的采集
1.植物样品的鉴定与采集地点的具体定位与记录； 2.根据研究目的与经验采集植物的不同部位； 3.样品的预处理：①修剪成长短适宜的组织块，用75%
乙醇擦拭样品表面，或短时间浸泡、灼烧，使表面干 燥后，用石蜡封住切口，放入无菌塑料袋，并保存于 低温盒中带回实验室；②将乙醇初步处理后的样品保 存于磷酸缓冲液中。 4. 样品的保存：通常保存于4℃中，并尽量缩短从采 样到分离操作的时间，减少组织表面腐生菌对内生菌 的影响。
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Entophytic Relationship
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第一节 植物内生菌的发现及其研究意义
一、内生菌现象及概念 1879年 De Bary对这一现象进行了描述。 Stone的定义：植物内生菌（endophyte)指这样一类微
生物，即被它们所感染的宿主植物不会或至少暂时不 会表现出明显的症状，能超乎在植物组织内观察到或 是从严格表面消毒的植物组织中分离得到，抑或是从 植物组织中直接扩增到其核酸DNA。 这一概念为目前比较接受，即教材所说：一切生活在 植物体内的腐生、寄生或共生的真菌、细菌、放线菌 等，也包括了那些潜伏在宿主体内的病原微生物。
第6现及其研究意义
二、研究意义 生态学意义：多种营养形式，影响到植物与食草动物
之间的关系。 相关的研究方向（请掌握）：群落组成、生物学特性、
生物多样性、种群生态学、进化生物学、内生菌与宿 主及草食动物的相互作用及它们所产生的代谢产物多 样性。 巨大的遗传多样性宝库，大量丰富新物种的来源。
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3.1 植物内生真菌
依据其宿主类别、定殖方式 、生态功能、进化关系可 将其分为两大类：即麦角类内生真菌 （clavicipitaceous endophyte)和非麦角内生真菌 （nonclavicipitaceous endophyte)。
麦角类内生真菌：一些与禾草、牧草等共生的内生真 菌；（分泌麦角碱，致人畜中毒，无症状、系统和、 种子携带）
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3.1 植物内生真菌
（二）非麦角类内生真菌 至今有超过1000篇文献对非麦角类内生真菌的报道 分为三类： 1）包含丰富物种，通常能在植物体根、茎、叶部位形
成广泛的定殖；通过种种或地下茎传播；在根际分布 少；可赋予植物非环境适应性和环境适应性；生长于 恶劣环境中的植物被此类内生真菌感染的频率高达 90%~100%。